| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-19页 |
| 乙型肝炎病毒 | 第12-14页 |
| 丙型肝炎病毒 | 第14-17页 |
| MicroRNAs | 第17-19页 |
| 第一部分 miR-130a通过调节Ⅰ型干扰素信号通路调控HCV复制的研究 | 第19-39页 |
| 材料与方法 | 第21-29页 |
| 1. 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1 细胞及病毒 | 第21页 |
| 1.2 MicroRNA模拟物及阴性对照 | 第21页 |
| 1.3 扩增引物 | 第21-22页 |
| 1.4 分子生物学及化学试剂 | 第22页 |
| 1.5 缓冲液及试剂配制 | 第22-23页 |
| 1.6 仪器设备及耗材 | 第23-24页 |
| 1.7 分子生物学软件 | 第24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.1 细胞培养及病毒感染 | 第24-25页 |
| 2.2 MicroRNA mimic转染 | 第25页 |
| 2.3 干扰素(IFNα)刺激实验 | 第25-26页 |
| 2.4 RNA提取及基因的荧光定量PCR检测 | 第26-28页 |
| 2.5 数据分析 | 第28页 |
| 3. 技术路线 | 第28-29页 |
| 研究结果 | 第29-37页 |
| 1. HCV感染后,细胞中miR-130a的表达显著增加 | 第29页 |
| 2. miR-130a高表达抑制HCV RNA的复制 | 第29-31页 |
| 2.1 miR-130a mimic转染及检测体系的建立 | 第29页 |
| 2.2 miR-130a mimic转染浓度的筛选 | 第29-30页 |
| 2.3 miR-130a高表达显著抑制HCV RNA的复制 | 第30-31页 |
| 3. miR-130a高表达促进Ⅰ型干扰素(IFNα/β)及干扰素刺激基因的表达 | 第31-34页 |
| 3.1 miR-130a高表达显著促进IFNα/β表达 | 第31-32页 |
| 3.2 miR-130a高表达显著促进干扰素刺激基因的表达 | 第32-34页 |
| 3.3 miR-130a表达不受干扰素刺激影响 | 第34页 |
| 4. miR-130a对ISGs的上调作用依赖于IFN与细胞表面干扰素受体(IFNAR)结合 | 第34-37页 |
| 讨论 | 第37-39页 |
| 第二部分 miR-130a与维生素D协同抗HCV作用研究 | 第39-50页 |
| 材料与方法 | 第40-42页 |
| 1. 实验材料 | 第40页 |
| 1.1 扩增引物 | 第40页 |
| 1.2 分子生物学及化学试剂 | 第40页 |
| 1.3 缓冲液及试剂配制 | 第40页 |
| 2. 实验方法 | 第40-41页 |
| 2.1 骨化三醇处理实验 | 第40-41页 |
| 2.2 HCV吸附入胞实验 | 第41页 |
| 3. 技术路线 | 第41-42页 |
| 研究结果 | 第42-48页 |
| 1. 骨化三醇抑制HCV RNA的复制 | 第42-43页 |
| 2. 骨化三醇显著增强miR-130a mimic的抗HCV作用 | 第43-44页 |
| 3. 骨化三醇增强miR-130a抗HCV效果的机制探究 | 第44-48页 |
| 3.1 骨化三醇不影响细胞中miR-130a的表达 | 第44-45页 |
| 3.2 骨化三醇与miR-130a均促进IFNα/β的表达但无叠加效应 | 第45页 |
| 3.3 骨化三醇可能通过影响HCV入胞增强miR-130a的抗HCV效果 | 第45-48页 |
| 讨论 | 第48-50页 |
| 第三部分 miR-130a通过调节靶基因PKLR的表达调控HCV和HBV复制的研究 | 第50-72页 |
| 材料与方法 | 第52-60页 |
| 1、实验材料 | 第52-56页 |
| 1.1 细胞及病毒 | 第52页 |
| 1.2 质粒、MicroRNA抑制剂及阴性对照 | 第52-53页 |
| 1.3 分子生物学及化学试剂 | 第53-54页 |
| 1.4 缓冲液及试剂配制 | 第54-55页 |
| 1.5 仪器设备及耗材 | 第55页 |
| 1.6 分子生物学软件 | 第55-56页 |
| 2、实验方法 | 第56-59页 |
| 2.1 细胞培养及病毒感染 | 第56页 |
| 2.2 质粒转染 | 第56-57页 |
| 2.3 双荧光报告基因实验 | 第57-58页 |
| 2.4 通过CRISPR/Cas9将miR-130a沉默 | 第58页 |
| 2.5 细胞活力检测 | 第58页 |
| 2.6 数据分析 | 第58-59页 |
| 3. 技术路线 | 第59-60页 |
| 研究结果 | 第60-71页 |
| 1. 生物信息学方法预测miR-130a可能作用的靶基因 | 第60页 |
| 2. 双荧光报告基因实验验证PKLR为miR-130a的靶基因 | 第60-62页 |
| 3. miR-130a通过调节靶基因PKLR的表达调控HCV的复制 | 第62-67页 |
| 3.1 miR-130a mimic抑制PKLR的表达和HCV的复制 | 第62-64页 |
| 3.2 miR-130a inhibitor上调PKLR的表达,促进HCV的复制 | 第64-65页 |
| 3.3 miR-130a gRNA上调PKLR的表达,促进HCV的复制 | 第65-67页 |
| 4. miR-130a通过调节靶基因PKLR的表达调节HBV的复制 | 第67-71页 |
| 4.1 miR-130a mimic抑制PKLR的表达及HBV的复制 | 第67-69页 |
| 4.2 miR-130a gRNA促进PKLR的表达及HBV的复制 | 第69-71页 |
| 讨论 | 第71-72页 |
| 第四部分 PKLR及丙酮酸调控HCV和HBV复制的研究 | 第72-89页 |
| 材料与方法 | 第73-76页 |
| 1、实验材料 | 第73页 |
| 1.1 质粒 | 第73页 |
| 1.2 分子生物学及化学试剂 | 第73页 |
| 2、实验方法 | 第73-74页 |
| 2.1 ISRE (Interferon stimulated response element)干扰素刺激应答原件活性的检测 | 第73页 |
| 2.2 丙酮酸处理实验 | 第73-74页 |
| 3. 技术路线 | 第74-76页 |
| 研究结果 | 第76-87页 |
| 1. PKLR调节HCV的复制 | 第76-78页 |
| 1.1 PKLR高表达促进HCV的复制 | 第76页 |
| 1.2 PKLR基因沉默抑制HCV的复制 | 第76-78页 |
| 2. PKLR调节HBV的复制 | 第78-79页 |
| 3. 丙酮酸在HCV复制中起着非常关键的作用 | 第79-80页 |
| 4. 丙酮酸对miR-130a高表达引起的病毒复制的抑制具有营救作用 | 第80-82页 |
| 5. 丙酮酸对PKLR gRNA引起的病毒复制的抑制具有营救作用 | 第82-85页 |
| 6. miR-130a对Ⅰ型IFN的调控不依赖PKLR通路 | 第85-87页 |
| 讨论 | 第87-89页 |
| 全文总结 | 第89-91页 |
| 1. 实验结果 | 第89页 |
| 2. 特色及创新之处 | 第89页 |
| 3. 存在的不足及下一步研究计划 | 第89-90页 |
| 4. 研究意义及展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 文献综述 MicroRNAs调节丙肝病毒感染及抗病毒免疫研究进展 | 第97-118页 |
| Part 1. The role of microRNA in HCV replication | 第98-112页 |
| Reference | 第106-112页 |
| Part 2. MicroRNA and its use for the treatment of HCV | 第112-118页 |
| Reference | 第115-118页 |
| 附录 英文缩写 | 第118-121页 |
| 个人简历 | 第121页 |
| 博士期间发表的学术论文 | 第121-122页 |
| 博士期间申报获批的项目 | 第122页 |
| 博士期间获得奖励 | 第122页 |
| 博士期间参加学术交流活动 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
