| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩写符号对照表 | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 产油微生物的研究进展 | 第9-11页 |
| 1.1.1 概述 | 第9页 |
| 1.1.2 微生物油脂在生物柴油中的应用进展 | 第9-10页 |
| 1.1.3 微生物油脂在食品中的应用进展 | 第10-11页 |
| 1.2 产油微生物及其脂质积累机制 | 第11-13页 |
| 1.2.1 产油微生物脂肪酸合成代谢调控 | 第11页 |
| 1.2.2 脂肪酸合成还原力NADPH的来源 | 第11-12页 |
| 1.2.3 脂肪酸合成底物的供应 | 第12-13页 |
| 1.3 浑浊红球菌PD630简介及其脂质积累研究现状 | 第13-15页 |
| 1.3.1 浑浊红球菌简介 | 第13页 |
| 1.3.2 浑浊红球菌PD630研究概况 | 第13-15页 |
| 1.4 代谢流量分析 | 第15-16页 |
| 1.4.1 计量学代谢流量分析方法 | 第15-16页 |
| 1.4.2 基于同位素标记实验的代谢流量分析方法 | 第16页 |
| 1.5 课题立题意义及主要研究内容 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验主要仪器与设备 | 第18页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 培养基及其配方 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第19页 |
| 2.1.5 实验所用菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.6 引物的合成和测序 | 第20-21页 |
| 2.2 ~（13）C标记的代谢流分析方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.2.2 发酵上清液组分分析 | 第21-22页 |
| 2.2.3 R. opacus PD630生物质的测定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 蛋白质水解、衍生及GC-MS分析 | 第23页 |
| 2.2.5 R. opacus PD630代谢网络的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.6 R. opacus PD630代谢流量配比的计算分析 | 第25-28页 |
| 2.3 分子克隆的实验方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 引物设计和目的基因片段的扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.3 过表达菌株的构建 | 第31页 |
| 2.3.4 R. opacus PD630重组菌株的培养 | 第31页 |
| 2.3.5 转录水平的检测 | 第31-33页 |
| 2.3.6 6PGDH酶活性水平的检测 | 第33页 |
| 2.4 统计数据分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-48页 |
| 3.1 ~（13）C标记的代谢流分析 | 第34-40页 |
| 3.1.1 HN和LN培养条件下R. opacus PD630的生长和细胞组成 | 第34-38页 |
| 3.1.2 R. opacus PD630细胞内~（13）C标记的代谢流分析结果 | 第38-40页 |
| 3.2 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶对R. opacus PD630脂质积累的影响 | 第40-48页 |
| 3.2.1 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因的克隆 | 第40-41页 |
| 3.2.2 gnd过表达重组载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.3 R. opacus PD630过表达重组菌株的构建 | 第42页 |
| 3.2.4 R. opacus PD630过表达重组菌株生长和脂质积累的分析 | 第42-45页 |
| 3.2.5 R. opacus PD630过表达重组菌株 6PGDH酶活性分析 | 第45-46页 |
| 3.2.6 R. opacus PD630过表达重组菌株相关基因转录水平的分析 | 第46-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录I：R. opacus PD630的代谢化学计量平衡式 | 第58-61页 |
| 附录II：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
