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拟南芥LOH1基因调节胚胎发生及胚后发育的功能研究

符号说明第4-7页
中文摘要第7-8页
Abstract第8-9页
1 前言第10-30页
    1.1 植物胚胎发生过程第10-12页
        1.1.1 早期合子极性的建立第10页
        1.1.2 顶细胞的发育过程及胚体的形成第10-11页
        1.1.3 基细胞的发育过程第11-12页
    1.2 植物胚胎发生的分子遗传调控第12-17页
        1.2.1 胚胎顶-基轴建立的基因表达调控第12-15页
        1.2.2 胚胎辐射对称轴建立的基因表达调控第15页
        1.2.3 胚胎形态建成的基因表达调控第15-16页
        1.2.4 雌雄配子体中特异表达基因对胚胎发生过程的影响第16-17页
    1.3 茎端分生组织的结构与功能第17-22页
        1.3.1 胚胎发生过程茎端分生组织的起始与子叶分化第17-18页
        1.3.2 茎端分生组织的结构第18-19页
        1.3.3 维持茎端分生组织的分子机制第19-22页
            1.3.3.1 WUS基因在调控茎端分生组织发育过程中的作用第20-21页
            1.3.3.2 STM基因在调控茎端分生组织发育过程中的作用第21-22页
    1.4 植物根端分生组织的结构与功能第22-26页
        1.4.1 胚胎发生过程根端分生组织的起始第22-24页
        1.4.2 根端分生组织的结构第24-25页
        1.4.3 静止中心是根干细胞池的组织者第25页
        1.4.4 WOX5基因在静止中心特异表达维持干细胞的特性第25-26页
        1.4.5 SHR对静止中心的功能维持是必须的第26页
    1.5 真核生物RNA的剪切第26-28页
        1.5.1 CRM保守结构域第27-28页
        1.5.2 Ⅱ类内含子的剪切第28页
    1.6 本研究的目的与意义第28-30页
2 材料与方法第30-46页
    2.1 实验材料第30-32页
        2.1.1 植物材料及生长条件第30页
        2.1.2 酶与生化试剂第30页
        2.1.3 菌株与载体第30页
        2.1.4 各种缓冲液及培养基配方第30-32页
        2.1.5 引物第32页
    2.2 实验方法第32-46页
        2.2.1 拟南芥的种植与培养第32-33页
        2.2.2 拟南芥基因组的提取与纯化第33页
        2.2.3 表达载体构建第33-38页
            2.2.3.1 PCR扩增第33-34页
            2.2.3.2 目的片段的回收与纯化第34页
            2.2.3.3 连接反应第34-35页
            2.2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备第35-36页
            2.2.3.5 大肠杆菌转化第36页
            2.2.3.6 DNA序列测定第36页
            2.2.3.7 高纯度小提质粒第36-37页
            2.2.3.8 质粒DNA的酶切鉴定第37-38页
            2.2.3.9 LR反应连入表达载体第38页
        2.2.4 农杆菌感受态细胞的制备及遗传转化第38-39页
            2.2.4.1 冻融法根癌农杆菌感受态的制备第38页
            2.2.4.2 冻融法转化农杆菌第38-39页
        2.2.5 拟南芥的转化及转基因拟南芥的鉴定第39-40页
            2.2.5.1 PCR鉴定拟南芥突变体是否纯合第39页
            2.2.5.2 农杆菌介导的花序浸染拟南芥转化法第39页
            2.2.5.3 转基因植株的筛选及初步鉴定第39-40页
        2.2.6 拟南芥胚胎透明第40页
        2.2.7 植物总RNA的提取与纯化第40-42页
        2.2.8 RNA的反转录及cDNA第一链的合成第42-43页
        2.2.9 Quantitative Real-Time PCR分析第43-44页
        2.2.10 转基因植株的GUS染色分析第44页
        2.2.11 共聚焦显微镜观察和图像处理第44页
        2.2.12 烟草介导的瞬时转化第44-45页
        2.2.13 FM4-64 染色(MA Peflalva 2005)第45-46页
3 结果与分析第46-59页
    3.1 LOH1功能缺失突变体鉴定第46-47页
    3.2 loh1突变体的表型分析第47-54页
    3.3 突变体的互补实验及表型分析第54页
    3.4 LOH1的表达模式分析第54-56页
    3.5 LOH1蛋白结构域分析第56-57页
    3.6 LOHl蛋白的亚细胞定位第57-59页
4 讨论第59-62页
5 结论第62-63页
参考文献第63-74页
致谢第74页

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