| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-32页 |
| 1.1 拟南芥花的发育 | 第11-14页 |
| 1.2 柱头结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.2.1 干柱头 | 第14-15页 |
| 1.2.2 湿柱头 | 第15页 |
| 1.3 花粉-柱头互作 | 第15-21页 |
| 1.3.1 干柱头物种中花粉-柱头的互作 | 第16-19页 |
| 1.3.2 湿柱头物种中花粉-柱头的互作 | 第19-21页 |
| 1.4 水通道蛋白 | 第21-30页 |
| 1.4.1 植物MIP蛋白超家族分类 | 第21-23页 |
| 1.4.2 水通道蛋白的结构特征和运输选择性 | 第23-25页 |
| 1.4.2.1 水通道蛋白的结构特征 | 第23-24页 |
| 1.4.2.2 水通道蛋白水分运输的选择性 | 第24-25页 |
| 1.4.3 植物水通道蛋白的表达与定位 | 第25-26页 |
| 1.4.4 植物水通道蛋白的合成与运输 | 第26-28页 |
| 1.4.5 植物水通道蛋白的活性调控 | 第28-30页 |
| 1.4.5.1 水通道蛋白的转录调控 | 第29页 |
| 1.4.5.2 水通道蛋白的磷酸化 | 第29-30页 |
| 1.4.5.3 H~+和Ca~(2+)的调节作用 | 第30页 |
| 1.5 本实验的目的意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-35页 |
| 2.1.1 植物材料及其生长条件 | 第32页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第32页 |
| 2.1.3 生化试剂及主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.4 各种缓冲液及培养基配方 | 第33-34页 |
| 2.1.5 实验中所用到的引物及序列 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-46页 |
| 2.2.1 拟南芥种子的处理及培养 | 第35页 |
| 2.2.1.1 拟南芥种子的处理及培养 | 第35页 |
| 2.2.1.2 拟南芥突变体的鉴定 | 第35页 |
| 2.2.2 拟南芥总DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.3 拟南芥总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.4 反转录cDNA第一链的合成 | 第37-38页 |
| 2.2.5 Quantitative Real-Time PCR分析 | 第38页 |
| 2.2.6 构建植物转基因表达载体的一般步骤 | 第38-42页 |
| 2.2.6.1 植物表达载体的构建策略 | 第38页 |
| 2.2.6.2 PCR引物设计 | 第38-39页 |
| 2.2.6.3 目的片段的PCR扩增 | 第39页 |
| 2.2.6.4 目的片段的回收(试剂盒法) | 第39页 |
| 2.2.6.5 入门载体连接 | 第39页 |
| 2.2.6.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.6.7 大肠杆菌感受态细胞的转化(热激法) | 第40-41页 |
| 2.2.6.8 大肠杆菌的菌落PCR鉴定 | 第41页 |
| 2.2.6.9 DNA测序 | 第41页 |
| 2.2.6.10 质粒DNA的提取 | 第41页 |
| 2.2.6.11 质粒DNA的酶切 | 第41-42页 |
| 2.2.6.12 目的片段连入表达载体 | 第42页 |
| 2.2.7 农杆菌GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第42-43页 |
| 2.2.7.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2.7.2 电转法转化农杆菌 | 第42-43页 |
| 2.2.8 农杆菌介导转化拟南芥 | 第43页 |
| 2.2.9 亚历山大染色 | 第43页 |
| 2.2.10 GUS染色 | 第43-44页 |
| 2.2.11 花粉水合时间观察 | 第44页 |
| 2.2.12 花粉管生长速率观察 | 第44页 |
| 2.2.13 PIP2；5的亚细胞定位 | 第44-45页 |
| 2.2.13.1 烟草瞬时转化 | 第44-45页 |
| 2.2.13.2 FM4-64染色 | 第45页 |
| 2.2.14 转化植株的胁迫处理 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-57页 |
| 3.1 PIP2；5功能缺失突变体鉴定及表型分析 | 第46-51页 |
| 3.1.1 PIP2；5功能缺失突变体的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.2 PIP2；5功能缺失突变体的表型分析 | 第47-51页 |
| 3.1.2.1 PIP2；5功能缺失突变体花粉活性及活力检测 | 第47-48页 |
| 3.1.2.2 野生型花粉在pip2；5柱头上水合延迟 | 第48-50页 |
| 3.1.2.3 花粉管在pip2；5纯合突变体体内生长速度及突变体结实率检测 | 第50-51页 |
| 3.2 PIP2；5表达模式及蛋白PIP2；5亚细胞定位分析 | 第51-55页 |
| 3.2.1 GUS报告基因分析PIP2；5的表达模式 | 第51-52页 |
| 3.2.2 pip2；5突变体互补实验及PIP2；5蛋白亚细胞定位 | 第52-55页 |
| 3.2.2.1 pip2；5突变体互补实验 | 第52-53页 |
| 3.2.2.2 PIP2；5蛋白的亚细胞的亚细胞定位 | 第53-55页 |
| 3.3 PIP2；5胁迫响应分析 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
