| 符号说明 | 第4-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 植物抗逆抗病研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2 PTPs级联信号途径 | 第17-20页 |
| 1.2.1 PTPs级联信号途径的研究现状 | 第17-19页 |
| 1.2.2 PTPs的分类 | 第19-20页 |
| 1.2.3 PTPs的结构特点 | 第20页 |
| 1.3 植物中PTPs级联信号途径的生物学功能 | 第20-25页 |
| 1.3.1 PTPs调控植物的抗病防卫反应 | 第21-22页 |
| 1.3.2 PTPs调控植物的非生物胁迫应答反应 | 第22-23页 |
| 1.3.3 PTPs参与调节植物激素信号转导过程 | 第23-24页 |
| 1.3.4 植物中的PTPs与活性氧 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 病原菌与载体 | 第26页 |
| 2.1.3 酶及其他试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 引物 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-50页 |
| 2.2.1 植物材料的培养及处理 | 第28-29页 |
| 2.2.2 制备并转化大肠杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.2.2.1 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第29页 |
| 2.2.2.2 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.2.3 大肠杆菌质粒DNA的提取和重组质粒酶切鉴定 | 第30页 |
| 2.2.3.1 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.3.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| 2.2.4 PCR扩增目的片段的回收 | 第30-31页 |
| 2.2.5 目的片段与克隆载体的连接 | 第31页 |
| 2.2.6 总RNA的提取 | 第31-33页 |
| 2.2.6.1 利用试剂盒法提取棉花总RNA | 第31-32页 |
| 2.2.6.2 CTAB法提取棉花总RNA | 第32-33页 |
| 2.2.6.3 Trizol法提取烟草总RNA | 第33页 |
| 2.2.7 cDNA第一链的合成 | 第33页 |
| 2.2.8 纯化cDNA并进行末端加尾反应 | 第33-34页 |
| 2.2.8.1 cDNA的纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.8.2 cDNA的末端加尾反应 | 第34页 |
| 2.2.9 GhIBR5 cDNA全长序列的获得 | 第34-37页 |
| 2.2.9.1 GhIBR5中间片段的获得 | 第34-35页 |
| 2.2.9.2 5'端序列的获得 | 第35页 |
| 2.2.9.3 3'端序列的获得 | 第35-36页 |
| 2.2.9.4 cDNA全长序列的获得 | 第36-37页 |
| 2.2.10 植物基因组DNA的提取和纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.10.1 CTAB法提取棉花基因组DNA | 第37页 |
| 2.2.10.2 利用小量法提取烟草基因组DNA | 第37页 |
| 2.2.10.3 植物基因组DNA的纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.11 GhIBR5全长基因组序列的获得 | 第38页 |
| 2.2.12 GhIBR5启动子序列的获得 | 第38-39页 |
| 2.2.13 qRT-PCR检测GhIBR5的表达量 | 第39-40页 |
| 2.2.13.1 qRT-PCR的反应体系与程序 | 第39-40页 |
| 2.2.13.2 数据处理 | 第40页 |
| 2.2.14 蛋白的提取及Western blot检测目的基因的表达量 | 第40-42页 |
| 2.2.14.1 蛋白提取液的配置及蛋白的提取 | 第40页 |
| 2.2.14.2 蛋白胶及相关溶液的配置 | 第40-41页 |
| 2.2.14.3 Western blot的步骤 | 第41-42页 |
| 2.2.15 植物GFP表达载体的构建与转化 | 第42-43页 |
| 2.2.15.1 植物GFP表达载体的构建 | 第42页 |
| 2.2.15.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.2.15.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第42-43页 |
| 2.2.15.4 农杆菌介导的瞬时侵染 | 第43页 |
| 2.2.16 棉花VIGS载体的构建及沉默植株的获得 | 第43-44页 |
| 2.2.16.1 棉花VIGS载体的构建 | 第43-44页 |
| 2.2.16.2 棉花沉默植株的获得 | 第44页 |
| 2.2.17 GhIBR5超表达转基因稳定植株的获得 | 第44-45页 |
| 2.2.17.1 植物表达载体的构建 | 第44页 |
| 2.2.17.2 转化本生烟草植株 | 第44-45页 |
| 2.2.17.3 再生植株的鉴定 | 第45页 |
| 2.2.18 渗透胁迫下测定转基因烟草的萌发率 | 第45-46页 |
| 2.2.19 烟草植株的培养及干旱实验分析 | 第46页 |
| 2.2.20 烟草叶片的失水率测定 | 第46页 |
| 2.2.21 转基因烟草植株的抗病分析 | 第46-47页 |
| 2.2.21.1 病原菌培养基的配制 | 第46页 |
| 2.2.21.2 病原菌的活化与培养 | 第46-47页 |
| 2.2.21.3 病原真菌的接种 | 第47页 |
| 2.2.21.4 转基因植株抗病性数据统计 | 第47页 |
| 2.2.22 组织化学染色分析 | 第47页 |
| 2.2.23 酵母双杂交 | 第47-49页 |
| 2.2.23.1 表达载体的构建及培养基的配置 | 第47-48页 |
| 2.2.23.2 主要溶液及培养基的配置 | 第48页 |
| 2.2.23.3 酵母感受态的制备 | 第48页 |
| 2.2.23.4 酵母共转化 | 第48-49页 |
| 2.2.24 网络信息资源及数据库 | 第49页 |
| 2.2.25 生物学软件 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-70页 |
| 3.1 棉花GhIBR5基因的分离及其序列分析 | 第50-53页 |
| 3.1.1 GhIBR5中间片段的分离 | 第50页 |
| 3.1.2 GhIBR55'片段和 3'片段的分离 | 第50页 |
| 3.1.3 GhIBR5全长cDNA的分离 | 第50-51页 |
| 3.1.4 氨基酸序列分析 | 第51-53页 |
| 3.2 GhIBR5基因组序列的分离及分析 | 第53页 |
| 3.3 GhIBR5启动子的序列分析 | 第53-54页 |
| 3.4 GhIBR5的亚细胞定位分析 | 第54-55页 |
| 3.5 GhIBR5的表达特性分析 | 第55-60页 |
| 3.5.1 GhIBR5的组织特异性分析 | 第55-56页 |
| 3.5.2 GhIBR5超表达植株在逆境胁迫下的表达特性分析 | 第56-58页 |
| 3.5.3 GhIBR5在外源信号分子处理下的表达特性分析 | 第58-60页 |
| 3.5.4 GhIBR5在蛋白水平的表达特性分析 | 第60页 |
| 3.6 GhIBR5沉默植株的获得及对病原菌的抗性分析 | 第60-62页 |
| 3.6.1 GhIBR5沉默植株的获得 | 第60-61页 |
| 3.6.2 GhIBR5沉默植株对病原菌的抗性分析 | 第61-62页 |
| 3.7 GhIBR5超表达本生烟植株的获得及鉴定 | 第62-63页 |
| 3.8 立枯丝核菌处理后烟草植株的表型分析 | 第63-65页 |
| 3.8.1 立枯丝核菌侵染后GhIBR5超表达植株的敏感性增加 | 第63页 |
| 3.8.2 立枯丝核菌侵染下抗性相关基因的表达水平 | 第63-64页 |
| 3.8.3 抗氧化系统在GhIBR5超表达烟草植株中被激活 | 第64-65页 |
| 3.9 GhIBR5超表达植株对不良环境的抗性分析 | 第65-68页 |
| 3.9.1 GhIBR5超表达植株在萌发期对干旱的抗性分析 | 第65-66页 |
| 3.9.2 GhIBR5超表达植株在成苗期对干旱的抗性分析 | 第66-67页 |
| 3.9.3 GhIBR5超表达植株对氧化胁迫的抗性分析 | 第67页 |
| 3.9.4 GhIBR5超表达植株在干旱胁迫下抗性相关基因的表达水平 | 第67-68页 |
| 3.10 GhIBR5的互作蛋白分析 | 第68-70页 |
| 4 讨论 | 第70-74页 |
| 4.1 GhIBR5属于蛋白磷酸酶家族中的PTPs | 第70页 |
| 4.2 GhIBR5的亚细胞定位 | 第70页 |
| 4.3 GhIBR5的表达受到多种信号分子的调控 | 第70-71页 |
| 4.4 GhIBR5的表达受到多种逆境胁迫的调控 | 第71-72页 |
| 4.5 GhIBR5激活了抗氧化系统和抗性相关基因的表达 | 第72页 |
| 4.6 GhIBR5的互作蛋白 | 第72-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第83页 |
