| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-26页 |
| 1.1 研究背景 | 第9-13页 |
| 1.1.1 纤维素及半纤维素 | 第9-10页 |
| 1.1.2 甘露聚糖 | 第10-13页 |
| 1.2 β-甘露聚糖酶 | 第13-22页 |
| 1.2.1 β-甘露聚糖酶的来源 | 第13-16页 |
| 1.2.2 β-甘露聚糖酶的分子结构及催化机制 | 第16-18页 |
| 1.2.3 β-甘露聚糖酶的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.4 β-甘露聚糖酶的应用 | 第20-22页 |
| 1.3 黑曲霉及其表达系统 | 第22-23页 |
| 1.4 黑葡萄穗霉 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.1 材料 | 第26-32页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 酶、试剂盒、主要试剂及厂家 | 第26-28页 |
| 2.1.3 主要仪器设备及厂家 | 第28-30页 |
| 2.1.4 培养基及其配制方法 | 第30页 |
| 2.1.5 溶液及其配制方法 | 第30-32页 |
| 2.1.6 引物合成、测序及蛋白质谱鉴定 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-42页 |
| 2.2.1 β-甘露聚糖酶基因的筛选及分析 | 第32页 |
| 2.2.2 葡萄穗霉基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.3 目的基因的克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.4 目的基因PCR产物的酶切及重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.5 重组质粒转化大肠杆菌 | 第35页 |
| 2.2.6 转化子中目的基因验证及重组质粒的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.7 黑曲霉G1原生质体的制备及转化 | 第36-37页 |
| 2.2.8 黑曲霉转化子菌株的筛选 | 第37页 |
| 2.2.9 黑曲霉转化子菌株的验证 | 第37-38页 |
| 2.2.10 黑曲霉转化子菌株的单孢分离、菌种保藏 | 第38-39页 |
| 2.2.11 重组黑曲霉菌株表达产物分析 | 第39-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-57页 |
| 3.1 β-甘露聚糖酶基因的筛选分析 | 第42页 |
| 3.2 β-甘露聚糖酶基因所编码蛋白的分析 | 第42-44页 |
| 3.2.1 信号肽预测 | 第42页 |
| 3.2.2 糖基化位点预测 | 第42页 |
| 3.2.3 与木霉来源β-甘露聚糖酶的同源性比对 | 第42-43页 |
| 3.2.4 系统进化树及分析 | 第43-44页 |
| 3.3 重组质粒的构建 | 第44-47页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第44-45页 |
| 3.3.2 重组质粒的构建及验证 | 第45-47页 |
| 3.4 重组黑曲霉菌株的培养、筛选及验证 | 第47-48页 |
| 3.4.1 黑曲霉转化及转化子的培养 | 第47页 |
| 3.4.2 黑曲霉转化子的筛选 | 第47页 |
| 3.4.3 重组黑曲霉菌株的验证及保藏 | 第47-48页 |
| 3.5 重组表达产物的分析 | 第48-50页 |
| 3.5.1 SDS-PAGE电泳分析 | 第48-50页 |
| 3.5.2 糖基化情况预测分析 | 第50页 |
| 3.5.3 质谱鉴定 | 第50页 |
| 3.6 重组表达产物的酶活测定 | 第50-53页 |
| 3.7 重组表达产物的酶学性质分析 | 第53-56页 |
| 3.7.1 最适pH及pH稳定性 | 第53-54页 |
| 3.7.2 最适温度及温度稳定性 | 第54-56页 |
| 3.8 两株重组菌株及产物的比较 | 第56-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-66页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第66-67页 |
| 8 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-71页 |