| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第4-9页 |
| 绪论 | 第9-23页 |
| 1 微生物脂肪酶的催化紊乱性 | 第9-12页 |
| 1.1 脂肪酶的底物紊乱性 | 第9-10页 |
| 1.2 脂肪酶的反应条件紊乱性 | 第10页 |
| 1.3 脂肪酶的催化紊乱性 | 第10-12页 |
| 2 微生物脂肪酶“盖子结构”及其功能 | 第12-16页 |
| 2.1 微生物脂肪酶盖子结构的多样性 | 第12-13页 |
| 2.2 微生物脂肪酶盖子结构功能的多样性 | 第13-16页 |
| 3 微生物脂肪酶盖子结构的蛋白质工程改造 | 第16-17页 |
| 3.1 定向进化 | 第16-17页 |
| 3.2 理性设计 | 第17页 |
| 4 Burkholderia sp.脂肪酶LipA | 第17-22页 |
| 4.1 Burkholderia sp.脂肪酶LipA的结构 | 第18-19页 |
| 4.2 Burkholderia sp.脂肪酶的应用 | 第19-22页 |
| 5 本课题的研究背景、内容及意义 | 第22-23页 |
| 第一章 脂肪酶突变体的模型分析 | 第23-29页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 材料 | 第23-24页 |
| 3 方法 | 第24-25页 |
| 3.1 构建Burkholderia sp.ZYB002脂肪酶LipA的三维结构模型 | 第24页 |
| 3.2 构建盖子结构置换突变体模型 | 第24-25页 |
| 3.3 突变体动力学模型分析 | 第25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-28页 |
| 4.1 构建Burkholderia sp.ZYB002脂肪酶LipA的三维结构模型 | 第25-26页 |
| 4.2 构建脂肪酶突变体的三维结构模型 | 第26-27页 |
| 4.3 突变体动力学模型分析 | 第27-28页 |
| 5 小结与讨论 | 第28-29页 |
| 第二章 突变体的构建 | 第29-45页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 材料 | 第29-32页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第29页 |
| 2.2 培养基与主要溶液 | 第29-31页 |
| 2.3 试剂 | 第31页 |
| 2.4 设备 | 第31-32页 |
| 3 方法 | 第32-37页 |
| 3.1 质粒pACYC-lipA-lipB的提取 | 第32页 |
| 3.2 制备E.coli BL21(DE3)感受态 | 第32-33页 |
| 3.3 E.coli BL21(DE3)感受态的验证 | 第33页 |
| 3.4 突变体的构建 | 第33-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-43页 |
| 4.1 质粒pACYC-lipA-lipB的提取 | 第37-38页 |
| 4.2 脂肪酶突变体编码基因的构建 | 第38-43页 |
| 5 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 脂肪酶LipA及其突变体的分离纯化及酶学性质分析 | 第45-65页 |
| 1 前言 | 第45页 |
| 2 材料 | 第45-49页 |
| 2.1 菌株 | 第45页 |
| 2.2 培养基和主要溶液 | 第45-48页 |
| 2.3 试剂 | 第48页 |
| 2.4 设备 | 第48-49页 |
| 3 方法 | 第49-55页 |
| 3.1 脂肪酶LipA和5种脂肪酶突变体粗酶液的制备 | 第49页 |
| 3.2 脂肪酶LipA的纯化 | 第49-50页 |
| 3.3 SDS-PAGE蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第50-51页 |
| 3.4 Westernblot鉴定脂肪酶LipA | 第51-52页 |
| 3.5 五个脂肪酶突变体的纯化 | 第52-53页 |
| 3.6 脂肪酶酶活测定 | 第53-54页 |
| 3.7 蛋白质含量的测定 | 第54-55页 |
| 3.8 脂肪酶LipA和5种脂肪酶突变体粗酶的酶动力学参数测定 | 第55页 |
| 4 结果和分析 | 第55-62页 |
| 4.1 脂肪酶LipA的纯化 | 第55-57页 |
| 4.2 Westernblot鉴定脂肪酶LipA | 第57-58页 |
| 4.3 五个脂肪酶突变体的纯化 | 第58-60页 |
| 4.4 脂肪酶LipA和5种脂肪酶突变体粗酶的酶动力学参数测定 | 第60-62页 |
| 5 小结与讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 结论与后续工作 | 第65-67页 |
| 1 结论 | 第65页 |
| 2 后续工作 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 个人简历 | 第81-83页 |
