| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第5-10页 |
| 绪论 | 第10-28页 |
| 1 GOD 概述 | 第10-14页 |
| 1.1 GOD催化机制 | 第10-11页 |
| 1.2 GOD的应用 | 第11-13页 |
| 1.3 GOD的测活方法 | 第13页 |
| 1.4 GOD的研究进展 | 第13-14页 |
| 2 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第14-21页 |
| 2.1 巴斯德毕赤酵母的优点 | 第14-15页 |
| 2.2 常见宿主菌及表达载体 | 第15-16页 |
| 2.3 影响毕赤酵母外源蛋白表达的因素 | 第16-18页 |
| 2.4 巴斯德毕赤酵母高密度发酵 | 第18-20页 |
| 2.5 毕赤酵母共表达伴侣蛋白策略 | 第20-21页 |
| 3 影响酶的热稳定性的因素 | 第21-22页 |
| 3.1 二硫键 | 第21页 |
| 3.2 氢键 | 第21页 |
| 3.3 疏水作用力 | 第21-22页 |
| 3.4 氨基酸组成 | 第22页 |
| 3.5 离子作用 | 第22页 |
| 4 计算机辅助设计酶分子改造 | 第22-24页 |
| 4.1 计算机辅助设计突变位点 | 第22-23页 |
| 4.2 荧光方法检测蛋白质热稳定性 | 第23-24页 |
| 5 论文的选题依据和意义 | 第24-25页 |
| 6 本研究的主要内容 | 第25-28页 |
| 6.1 高表达菌株的构建 | 第25页 |
| 6.2 GOD高产菌株5L发酵罐工艺的优化 | 第25-26页 |
| 6.3 定点突变提高GOD热稳定性 | 第26-28页 |
| 第一章 GOD表达菌株的构建及共表达分子伴侣对其表达的影响 | 第28-46页 |
| 1 材料与方法 | 第28-38页 |
| 1.1 材料 | 第28-31页 |
| 1.2 实验方法 | 第31-38页 |
| 2 结果 | 第38-45页 |
| 2.1 GOD表达载体的构建和表达 | 第38-39页 |
| 2.2 摇瓶检测PDI和VHb对GOD表达的影响 | 第39-42页 |
| 2.3 5L发酵罐表达GOD | 第42-45页 |
| 3 小结 | 第45-46页 |
| 第二章 高产GOD菌株5L罐发酵工艺优化 | 第46-60页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-58页 |
| 2.1 pH对GOD表达的影响 | 第47-49页 |
| 2.2 温度对GOD表达的影响 | 第49-51页 |
| 2.3 VB_2对GOD表达的影响 | 第51-53页 |
| 2.4 混合流加山梨醇 | 第53-56页 |
| 2.5 共表达PDI-VHb菌株的发酵 | 第56-58页 |
| 3 小结 | 第58-60页 |
| 第三章 计算机辅助设计GOD定点突变 | 第60-72页 |
| 1 材料与方法 | 第60-63页 |
| 1.1 材料 | 第60页 |
| 1.2 方法 | 第60-63页 |
| 2 结果分析 | 第63-70页 |
| 2.1 突变GOD的表达 | 第63-65页 |
| 2.2 RT-PCR检测GOD Tm值 | 第65-66页 |
| 2.3 5L发酵罐表达突变GOD | 第66-69页 |
| 2.4 发酵上清在60℃热稳定性 | 第69页 |
| 2.5 发酵上清在不同温度的热稳定性 | 第69-70页 |
| 3 小结 | 第70-72页 |
| 第四章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 1 研究结论 | 第72-73页 |
| 2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 攻读学位期间承担的主要任务及成果 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 个人简历 | 第86-90页 |