| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 CD147蛋白概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 CD147分子结构 | 第12-13页 |
| 1.1.2 CD147的生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.2 CD147的糖基化修饰与肿瘤 | 第15-19页 |
| 1.2.1 蛋白质的糖基化修饰 | 第15-16页 |
| 1.2.2 蛋白糖链结构变化与肿瘤发生 | 第16-17页 |
| 1.2.3 CD147的糖基化特性 | 第17-18页 |
| 1.2.4 CD147糖基化与其功能行使 | 第18-19页 |
| 1.3 CD147糖基化检测的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 靶向CD147的探针及传感器研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3.2 糖基化检测的研究进展 | 第20页 |
| 1.3.3 CD147糖基化检测的研究现状及挑战 | 第20-21页 |
| 1.3.4 CD147糖基化检测的基因编码FRET荧光传感器的研究展望 | 第21-22页 |
| 1.4 研究内容与预期结果 | 第22-24页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第22页 |
| 1.4.2 预期结果 | 第22-24页 |
| 第2章 CD147糖基化水平检测的基因编码FRET荧光传感器的设计、构建及筛选 | 第24-36页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 基因编码FRET荧光传感器的设计 | 第24-26页 |
| 2.3 实验材料与方法 | 第26-32页 |
| 2.3.1 荧光传感器表达质粒的构建 | 第26-31页 |
| 2.3.2 活细胞共定位实验 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第32-34页 |
| 2.4.1 荧光传感器表达质粒的构建结果 | 第32-33页 |
| 2.4.2 荧光传感器CFP/YFP motif的初筛 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-36页 |
| 第3章 CD147糖基化水平检测的基因编码FRET荧光传感器的工作效率检测 | 第36-50页 |
| 3.1 引言 | 第36-37页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 胞膜与胞质蛋白的分离与提取 | 第37页 |
| 3.2.2 Western blot实验 | 第37-38页 |
| 3.2.3 PHA-L凝集素印迹实验 | 第38-39页 |
| 3.2.4 光漂白实验 | 第39页 |
| 3.2.5 活细胞成像 | 第39页 |
| 3.2.6 数据处理与分析 | 第39-40页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第40-49页 |
| 3.3.1 TM/SW处理抑制CD147的糖基化 | 第40-42页 |
| 3.3.2 光漂白实验 | 第42-43页 |
| 3.3.3 荧光传感器对TM处理下CD147糖基化水平降低的响应 | 第43-45页 |
| 3.3.4 GnT-V过表达促进CD147的高糖基化 | 第45-46页 |
| 3.3.5 荧光传感器对GnT-V过表达下CD147糖基化升高的响应 | 第46-47页 |
| 3.3.6 荧光传感器检测TM处理下CD147糖基化受抑制的动态过程 | 第47-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-50页 |
| 第4章 CD147糖基化水平检测的基因编码FRET荧光传感器的靶向特异性验证 | 第50-60页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第50-55页 |
| 4.2.1 免疫共沉淀实验(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第50-51页 |
| 4.2.2 CD147糖基化位点的定点突变 | 第51-52页 |
| 4.2.3 免疫荧光实验(Immunofluorescence,IF) | 第52-53页 |
| 4.2.4 细胞成像与数据分析 | 第53页 |
| 4.2.5 荧光传感器融合蛋白的原核表达与纯化 | 第53-55页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第55-59页 |
| 4.3.1 Co-IP验证荧光传感器与CD147存在胞内相互作用 | 第55-56页 |
| 4.3.2 点突变CD147的真核表达质粒构建 | 第56页 |
| 4.3.3 点突变CD147的表达与定位检测 | 第56-57页 |
| 4.3.4 荧光传感器对突变型CD147的糖基化水平响应 | 第57-58页 |
| 4.3.5 荧光传感器融合蛋白的原核表达及纯化 | 第58-59页 |
| 4.4 小结 | 第59-60页 |
| 第5章 总结与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
