| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 英文缩写预览表 | 第13-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-29页 |
| 一、环形泰勒虫研究进展 | 第15-17页 |
| ·环形泰勒虫的病原形态 | 第15页 |
| ·环形泰勒虫的生活史 | 第15-16页 |
| ·环形泰勒虫的入侵机制 | 第16页 |
| ·环形泰勒虫的致病机理 | 第16-17页 |
| ·预防与治疗 | 第17页 |
| 二、酵母双杂交系统研究进展 | 第17-19页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交系统的特点 | 第19页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第19页 |
| 三、Galectin-1研究进展 | 第19-29页 |
| ·半乳糖凝集素的基本特征 | 第19-20页 |
| ·Galectin-1的分子结构 | 第20-21页 |
| ·Galectin-1的表达调节 | 第21-22页 |
| ·Galectin-1的分布 | 第22页 |
| ·Galectin-1的分子伴侣及生物学功能 | 第22-29页 |
| 第二部分 研究报告 | 第29-61页 |
| 第一章 Galectin-1表达量差异分析及亚细胞定位 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-32页 |
| ·引物的设计和合成 | 第29-30页 |
| ·Galectin-1表达量差异分析 | 第30-31页 |
| ·环形泰勒虫裂殖体感染淋巴细胞总RNA的提取 | 第30页 |
| ·牛正常淋巴细胞的分离及总RNA的提取 | 第30页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第30-31页 |
| ·实时荧光定量PCR检测Galectin-1的表达量 | 第31页 |
| ·Galectin-1的亚细胞定位分析 | 第31-32页 |
| ·亚细胞定位载体的构建 | 第31页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-34页 |
| ·Galectin-1的表达量差异分析 | 第32页 |
| ·Galectin-1基因的克隆 | 第32页 |
| ·亚细胞定位重组载体的构建 | 第32-33页 |
| ·Galectin-1亚细胞定位分析 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第二章 Galectin-1的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第35-41页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·环形泰勒虫裂殖体感染淋巴细胞总RNA的提取 | 第35页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第35页 |
| ·Galectin-1的原核表达 | 第35-36页 |
| ·Galectin-1重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第36页 |
| ·Western-blot分析 | 第36-37页 |
| ·多克隆抗体对天然蛋白的识别性检测 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·总RNA的提取 | 第37页 |
| ·Galectin-1基因的扩增 | 第37-38页 |
| ·Galectin-1的原核表达 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的Western-blot | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定 | 第41-46页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-43页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·环形泰勒虫裂殖体感染淋巴细胞总RNA的提取 | 第41页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第41页 |
| ·Galectin-1基因的扩增 | 第41页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·酵母菌Gold感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·转化质粒 | 第42-43页 |
| ·诱饵质粒的自启动性检测 | 第43页 |
| ·诱饵质粒的毒性检测 | 第43页 |
| ·诱饵质粒的表达性检测 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-44页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·诱饵质粒的自启动性检测 | 第44页 |
| ·诱饵质粒的毒性检测 | 第44页 |
| ·诱饵质粒的表达性检测 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 环形泰勒虫裂殖体感染淋巴细胞酵母双杂交文库的构建 | 第46-54页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-49页 |
| ·环形泰勒虫裂殖体感染淋巴细胞总RNA的提取 | 第46页 |
| ·mRNA的分离与纯化 | 第46页 |
| ·mRNA的浓缩 | 第46-47页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第47页 |
| ·LD-PCR扩增ds cDNA | 第47-48页 |
| ·ds cDNA的纯化 | 第48页 |
| ·酵母菌Y187感受态细胞的制备 | 第48页 |
| ·转化质粒 | 第48-49页 |
| ·铺板培养及文库的冻存 | 第49页 |
| ·文库质量的鉴定 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-52页 |
| ·总RNA的提取 | 第49页 |
| ·mRNA的纯化及浓缩 | 第49-50页 |
| ·ds cDNA的扩增、纯化及浓缩 | 第50-51页 |
| ·文库质量的鉴定 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 酵母双杂交系统筛选与Galectin-1相互作用的蛋白 | 第54-60页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·对照试验 | 第54-55页 |
| ·诱饵菌的扩大培养 | 第55页 |
| ·文库菌与诱饵菌杂交 | 第55页 |
| ·阳性克隆的PCR分析 | 第55-56页 |
| ·序列的比对与分析 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-58页 |
| ·对照试验 | 第56页 |
| ·酵母杂交筛选互作蛋白 | 第56-57页 |
| ·相互作用蛋白的功能聚类分析 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第六章 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
