| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-28页 |
| 第一章 蛋白纯化方式的研究 | 第14-18页 |
| 1 蛋白分离纯化手段的简介 | 第14-16页 |
| ·溶解度的不同 | 第14页 |
| ·特殊亲和性 | 第14-15页 |
| ·亲疏水性的区别 | 第15页 |
| ·电荷差异性 | 第15页 |
| ·蛋白分子量的大小 | 第15-16页 |
| 2 凝胶层析与分子筛Marker | 第16页 |
| 3 荧光蛋白与FRET | 第16-18页 |
| 第二章 亮氨酸拉链相关研究 | 第18-26页 |
| 1 α-螺旋 | 第18页 |
| 2 亮氨酸拉链的结构 | 第18-20页 |
| 3 人类B-ZIP蛋白组分二聚体的分类 | 第20-22页 |
| 4 二聚体的特异性的调节 | 第22-23页 |
| 5 同源二聚体家族 | 第23-24页 |
| 6 同二聚体和异二聚体B-ZIP家族 | 第24页 |
| 7 异二聚体的B-ZIP家族 | 第24-25页 |
| 8 蛋白质互作的研究 | 第25-26页 |
| 本课题研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 技术路线 | 第27-28页 |
| 第二部分 研究内容 | 第28-66页 |
| 第一章 一种可视型分子筛体系的构建 | 第28-51页 |
| 1 前言 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-42页 |
| ·生化试剂和培养基的配制 | 第29页 |
| ·菌株与载体 | 第29页 |
| ·各类载体的构建 | 第29-37页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·感受态制备 | 第30-31页 |
| ·质粒的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增RFP、YFP、GFP、PK_2基因片段 | 第32页 |
| ·双模板法扩增RC、RY片段 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的处理 | 第33-34页 |
| ·加A处理 | 第34页 |
| ·TA连接与转化测序 | 第34-35页 |
| ·酶切 | 第35页 |
| ·产物割胶回收 | 第35-36页 |
| ·T4连接与转化 | 第36-37页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第37-38页 |
| ·Ni柱纯化蛋白的原理 | 第37页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| ·蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·透析袋的处理方法 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第38-40页 |
| ·制胶 | 第38-39页 |
| ·电泳 | 第39-40页 |
| ·染色和脱色 | 第40页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第40-41页 |
| ·标准曲线的制作 | 第41页 |
| ·样品浓度测定 | 第41页 |
| ·分子筛层析检测 | 第41-42页 |
| ·准备工作 | 第41-42页 |
| ·分子筛层析 | 第42页 |
| 3 实验结果 | 第42-49页 |
| ·RFP的扩增结果 | 第42-43页 |
| ·RC、RY的片段的扩增 | 第43页 |
| ·His_9-YRY的结果验证 | 第43-44页 |
| ·His_9-PK_2-GFP的构建过程 | 第44-45页 |
| ·蛋白表达纯化SDS-PAGE电泳图分析 | 第45-48页 |
| ·RED蛋白的诱导与纯化 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白RC的表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白YRY纯化结果 | 第47页 |
| ·融合蛋白PK_2-GFP纯化结果 | 第47-48页 |
| ·纯化所得四种蛋白的对比图 | 第48页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第48页 |
| ·分子筛蛋白分离效果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第二章 亮氨酸拉链工具的初探 | 第51-66页 |
| 1 前言 | 第51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-57页 |
| ·酶与生化试剂 | 第51页 |
| ·菌株和其他实验材料 | 第51页 |
| ·初步亮氨酸拉链长度选择的分子间实验 | 第51-53页 |
| ·质粒提取 | 第52页 |
| ·初步拉链长度的选择 | 第52-53页 |
| ·荧光检测 | 第53页 |
| ·以LeCBL_3为桥梁的分子内实验 | 第53-55页 |
| ·载体的构建 | 第53-55页 |
| ·蛋白诱导及纯化 | 第55页 |
| ·荧光检测 | 第55页 |
| ·利用人鼻病毒3C酶切位点酶切后检测 | 第55-56页 |
| ·pET23a(+)-Lz-CFP-3C-YFP-Lz/Lz’和pET23a(+)-CFP-3C-YFP载体的构建 | 第55-56页 |
| ·蛋白诱导及纯化 | 第56页 |
| ·结果检测 | 第56页 |
| ·缩减碱性区和减少拉链单元数的实验 | 第56-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-64页 |
| ·分子电泳检测 | 第57-59页 |
| ·His_9-SLz-CFP和His_9-YFP-SLz的扩增 | 第57-58页 |
| ·片段CCY的连接验证 | 第58页 |
| ·最终载体的验证 | 第58-59页 |
| ·蛋白表达纯化SDS-PAGE电泳及分析 | 第59-62页 |
| ·SLz-CFP,YFP-SLz,YFP-SLz'蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·实验对照度蛋白CFP-3C-YFP的表达纯化 | 第60页 |
| ·实验组蛋白Lz-CFP-3C-YFP-Lz/Lz'的表达纯化 | 第60-61页 |
| ·改造拉链的蛋白电泳检测 | 第61-62页 |
| ·荧光检测 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 结论与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 缩略词表 | 第76-77页 |
