| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩写与符号清单 | 第11-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-29页 |
| ·酯酶 | 第16-21页 |
| ·脂类水解酶 | 第16页 |
| ·酯酶的分类和来源 | 第16-17页 |
| ·海洋来源酯酶的特点及海洋细菌P.halotolerans B2~T简介 | 第17页 |
| ·酯酶的立体结构和催化机制 | 第17-19页 |
| ·酯酶的可溶性表达策略 | 第19-21页 |
| ·酶催化在手性药物合成中的重要性 | 第21-22页 |
| ·手性及手性药物的意义 | 第21页 |
| ·手性化合物与手性药物合成的主要途径 | 第21-22页 |
| ·水解酶在手性化合物合成中的应用 | 第22页 |
| ·酶催化与手性抗抑郁药物合成 | 第22-28页 |
| ·抑郁症 | 第22-23页 |
| ·抗抑郁药物概述 | 第23-26页 |
| ·酶催化制备帕罗西汀研究进展 | 第26-28页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 2 海洋来源新型酯酶的克隆与可溶性表达 | 第29-49页 |
| ·材料与方法 | 第29-39页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-47页 |
| ·酯酶基因的引物设计 | 第39页 |
| ·酯酶基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·表达载体、宿主细胞的选择及重组表达载体pen-pET-28b(+)的构建 | 第40-42页 |
| ·重组表达载体pen-pET-28b(+)在E coli Rosseta中的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体pen-pET-28b(+)与分子伴侣质粒pGro7在E coli BL21(DE3)中的共表达 | 第43-45页 |
| ·蛋白浓度测定的标准曲线 | 第45页 |
| ·对硝基苯酚法测定酶活力的标准曲线 | 第45-46页 |
| ·酯酶PE8亲和层析纯化及效果 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 3 海洋来源新型酯酶在抗抑郁药物中间体合成中的应用 | 第49-65页 |
| ·材料与方法 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-53页 |
| ·实验结果与分析 | 第53-63页 |
| ·高效液相色谱分析方法的建立 | 第53页 |
| ·3-DFG与3-FGA标准曲线的制作 | 第53-55页 |
| ·酶的筛选 | 第55页 |
| ·有机助溶剂种类的筛选 | 第55-56页 |
| ·有机助溶剂浓度的筛选 | 第56-57页 |
| ·最适反应pH的分析 | 第57-58页 |
| ·最适离子浓度的分析 | 第58-60页 |
| ·最适反应温度的分析 | 第60页 |
| ·反应时间与产率,ee值,转化率的关系 | 第60-62页 |
| ·PE8粗酶对反应的影响 | 第62页 |
| ·酶催化前手性二酯的去对称化合成3-取代戊二酸单酯 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 4 酯酶PE8的酶学性质研究 | 第65-74页 |
| ·材料与方法 | 第65-67页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-73页 |
| ·PE8序列分析 | 第67-68页 |
| ·PE8最适催化底物测定 | 第68-69页 |
| ·二价阳离子对PE8催化活性的影响 | 第69-70页 |
| ·PE8最适催化温度测定 | 第70-71页 |
| ·PE8最适催化pH测定 | 第71-72页 |
| ·PE8酶催化动力学研究 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 5 结论与展望 | 第74-77页 |
| ·结论 | 第74-75页 |
| ·展望 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
