| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-42页 |
| ·K-Ras蛋白 | 第14-26页 |
| ·Ras蛋白超家族 | 第14-17页 |
| ·Ras蛋白家族 | 第17页 |
| ·Ras癌基因 | 第17-19页 |
| ·Ras蛋白 | 第19-20页 |
| ·Ras蛋白的结构 | 第20-22页 |
| ·Ras信号通路 | 第22-26页 |
| ·钙信号与钙调蛋白 | 第26-34页 |
| ·钙信号 | 第26-28页 |
| ·钙调蛋白的结构 | 第28-30页 |
| ·钙调蛋白的调节因子和效应物 | 第30-31页 |
| ·钙调蛋白的功能 | 第31-33页 |
| ·钙调蛋白与配体的相互作用 | 第33-34页 |
| ·细胞钙信号对Ras信号通路的调控 | 第34-37页 |
| ·研究蛋白质相互作用的生物物理方法 | 第37-41页 |
| ·本课题的研究意义 | 第41-42页 |
| 第二章 钙调蛋白与K-RasB相互作用的研究 | 第42-75页 |
| ·引言 | 第42-44页 |
| ·实验材料与方法 | 第44-51页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·蛋白质表达与纯化 | 第45页 |
| ·Ras蛋白的GppNHp交换 | 第45-46页 |
| ·CaM的纯化 | 第46页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第46页 |
| ·Ras蛋白的体外法尼基化 | 第46-47页 |
| ·化学交联 | 第47页 |
| ·免疫印记 | 第47-48页 |
| ·等温滴定量热法 | 第48页 |
| ·荧光滴定 | 第48-49页 |
| ·GTPase活力测定 | 第49-51页 |
| ·结果 | 第51-72页 |
| ·CaM和K-RasB的纯化及鉴定 | 第51-53页 |
| ·K-RasB以GTP依赖的形式与Ca~(2+)/CaM形成1：1的复合物 | 第53-57页 |
| ·K-RasB的C端多聚赖氨酸区域在K-RasB和Ca~(2+)/CaM的相互作用中发挥重要作用 | 第57-60页 |
| ·K-Ras-(1-166)与Ca~(2+)/CaM结合而GST-K-RasB-HVR不与Ca~(2+)/CaM结合 | 第60-63页 |
| ·K-RasB的多聚赖氨酸区域决定了其与Ca~(2+)/CaM相互作用的特异性 | 第63-68页 |
| ·K-RasB的法尼基化促进了K-RasB与Ca~(2+)/CaM的结合 | 第68-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 第三章 MALDI-TOF质谱法研究K-Ras-(1-166)与钙调蛋白的相互作用 | 第75-84页 |
| ·引言 | 第75-76页 |
| ·材料与方法 | 第76-77页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·质粒和蛋白质 | 第76页 |
| ·化学交联和免疫印记 | 第76页 |
| ·等温滴定量热法 | 第76-77页 |
| ·荧光滴定 | 第77页 |
| ·MALDI-TOF质谱法 | 第77页 |
| ·结果 | 第77-82页 |
| ·K-RasB-His与CaM形成1：1的复合物且不具有GTP依赖性 | 第77-82页 |
| ·MALDI-TOF质谱法和荧光滴定法研究K-Ras-(1-166)-GDP与CaM的相互作用 | 第82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第四章 拥挤环境中Arf6与β-arrestin-1相互作用的研究 | 第84-107页 |
| ·引言 | 第84-91页 |
| ·材料与方法 | 第91-94页 |
| ·Arf6及突变体的表达与纯化 | 第91-92页 |
| ·β-arrestin-1的表达与纯化 | 第92-93页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第93页 |
| ·Arf6的荧光光谱 | 第93页 |
| ·荧光滴定 | 第93-94页 |
| ·结果 | 第94-105页 |
| ·蛋白质纯化 | 第94页 |
| ·Arf6的荧光光谱 | 第94-95页 |
| ·无拥挤试剂时Arf6与β-arrestin-1的相互作用 | 第95-98页 |
| ·无拥挤试剂时Arf6突变体与β-arrestin-1的相互作用 | 第98页 |
| ·拥挤试剂中Arf6Q67L-GTP与β-arrestin-1的相互作用 | 第98-101页 |
| ·拥挤试剂中Arf6T27N-GDP与β-arrestin-1的相互作用 | 第101-105页 |
| ·讨论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-128页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
