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XCD1基因调控拟南芥抗镉的机理研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-9页
致谢第9-13页
插图清单第13-15页
表格清单第15-16页
第一部分 文献综述第16-26页
   ·重金属镉(Cd)与植物第16-21页
     ·重金属对植物的损伤第16-18页
     ·重金属镉进入植物体的途径第18页
     ·重金属镉在植物体内的运输途径第18-19页
     ·重金属镉在植物体内的积累第19页
     ·植物对重金属的耐受机制第19-21页
   ·细胞壁与重金属第21-23页
     ·细胞壁的组分第21-22页
     ·植物细胞壁对金属离子的抗性机制第22-23页
   ·甘露聚糖酶第23-25页
     ·甘露聚糖第23页
     ·甘露聚糖酶第23-25页
   ·研究的目的和意义第25-26页
第二部分 材料和方法第26-50页
   ·实验材料第26页
     ·植物材料第26页
     ·菌体和质粒载体第26页
   ·主要试剂第26-32页
     ·常用分子生物学试剂盒第26页
     ·常用酶类第26-27页
     ·常用生化试剂第27页
     ·常用溶液与试剂的配制第27-32页
   ·主要仪器与设备第32-33页
   ·实验方法第33-50页
     ·XCD1 基因 pET-32a(+)原核表达载体构建第33-35页
     ·EasyTaq Polymerase PCR 反应第35页
     ·质粒 DNA 提取(Kit)第35-37页
     ·DNA 产物纯化(Kit)第37-38页
     ·琼脂糖凝胶电泳(Agarose gel electrophoresis)检测核酸第38页
     ·目的条带 DNA 的回收与纯化(Kit)第38-39页
     ·蛋白质的电泳检测第39-40页
     ·原核表达蛋白的条件优化第40-41页
     ·原核表达蛋白的可溶性鉴定第41页
     ·原核表达蛋白的大量诱导表达第41页
     ·原核表达蛋白的纯化第41-42页
     ·CTAB 法提取拟南芥全基因组 DNA第42页
     ·DH5α感受态细胞制备第42-43页
     ·E.coli 感受态细胞的转化第43页
     ·农杆菌感受态细胞制备第43页
     ·农杆菌感受态细胞的电击转化第43-44页
     ·花序侵染法转化拟南芥第44页
     ·GUS 染色第44-45页
     ·拟南芥根部细胞壁的提取第45页
     ·细胞壁组分分离第45-46页
     ·果胶含量的测定第46页
     ·苯酚-硫酸法测量多糖含量第46-47页
     ·Cd 含量的测定第47页
     ·β-甘露聚糖酶酶活性的测定第47-48页
     ·拟南芥的种植培养第48页
     ·灭菌第48-50页
第三部分 实验结果与分析第50-81页
   ·XCD1 基因敲除突变体的功能验证第50-52页
   ·XCD1 基因启动子的 GUS 分析第52-53页
     ·XCD1(promoter):GUS 转基因植株的筛选第52页
     ·XCD1(promoter):GUS 转基因植株的鉴定第52-53页
     ·GUS 染色第53页
   ·XCD1 基因编码蛋白的亚细胞定位第53-56页
     ·XCD1-GFP 重组载体转入农杆菌第53-55页
     ·带有重组载体的农杆菌注射小叶烟草第55页
     ·XCD1 蛋白亚细胞定位观察第55-56页
   ·XCD1 基因编码一个β-甘露聚糖水解酶第56-68页
     ·XCD1 基因原核表达载体的构建第56-62页
     ·XCD1 蛋白的诱导表达和纯化第62-66页
     ·XCD1 纯化蛋白的酶活性分析第66-68页
   ·XCD1 基因影响植株体内镉的积累第68-69页
   ·XCD1 基因突变导致植株根部细胞壁镉积累增加第69-70页
   ·XCD1 基因突变改变细胞壁中β-甘露聚糖酶活性第70页
   ·XCD1 基因影响细胞壁各组分含量的变化第70-74页
     ·细胞壁中纤维素的含量第71-72页
     ·细胞壁中果胶的含量第72-73页
     ·细胞壁中半纤维素的含量第73-74页
   ·XCD1 基因突变导致植物细胞壁各组分中 Cd 含量变化第74-75页
   ·外源甘露糖处理导致镉胁迫耐受增加第75-80页
     ·甘露糖缓解镉胁迫的表型第76-77页
     ·甘露糖缓解镉胁迫的根长鲜重分析第77-78页
     ·镉胁迫下加入甘露糖后植株体内的镉含量第78-79页
     ·外源甘露糖影响根部细胞壁镉含量第79-80页
   ·甘露糖与镉的直接作用第80-81页
第四部分 讨论第81-84页
参考文献第84-91页
附录:硕士期间发明专利与发表论文第91-92页

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