人PTH的表达纯化及其免疫吸附剂的制备
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-29页 |
| ·慢性肾衰竭 | 第11-12页 |
| ·慢性肾衰竭概述 | 第11-12页 |
| ·慢性肾衰竭的治疗 | 第12页 |
| ·甲状旁腺激素及其致病机理 | 第12-17页 |
| ·甲状旁腺激素概述 | 第12-15页 |
| ·甲状旁腺激素致病机理 | 第15页 |
| ·继发性甲状旁腺功能亢进的治疗 | 第15-17页 |
| ·基因重组蛋白纯化与鉴定技术 | 第17-22页 |
| ·蛋白纯化技术的选择策略与组合 | 第17-20页 |
| ·重组蛋白的定量与定性分析 | 第20-22页 |
| ·卵黄抗体技术 | 第22-27页 |
| ·卵黄抗体特征 | 第22-24页 |
| ·卵黄抗体的提取和分离纯化 | 第24-26页 |
| ·卵黄抗体的检测 | 第26-27页 |
| ·本论文的研究基础、目标和主要内容 | 第27-29页 |
| 2 重组蛋白PTH的原核表达 | 第29-42页 |
| ·绪论 | 第29页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·材料和试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·目的基因的合成 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·BCA法测定总蛋白含量 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及表达条件优化 | 第34页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测 | 第34页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·实验结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·重组质粒的构建、目的片段转化及蛋白表达 | 第35-37页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测 | 第37页 |
| ·重组蛋白的表达条件优化 | 第37-40页 |
| ·小结 | 第40-42页 |
| 3 重组蛋白PTH的分离纯化 | 第42-56页 |
| ·绪论 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·材料和试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·菌体的破碎 | 第43页 |
| ·聚乙烯亚胺沉淀 | 第43页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第43-44页 |
| ·等电点沉淀 | 第44页 |
| ·SP强阳离子交换层析 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的纯度分析 | 第45页 |
| ·重组蛋白性质检测 | 第45-46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-55页 |
| ·裂解缓冲液离子强度优化 | 第46页 |
| ·聚乙烯亚胺沉淀条件优化 | 第46-48页 |
| ·硫酸铵沉淀条件优化 | 第48页 |
| ·等电点沉淀条件优化 | 第48-49页 |
| ·SP强阳离子交换层析条件优化 | 第49-51页 |
| ·重组蛋白的纯度分析 | 第51-53页 |
| ·纯化工艺总结 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白性质检测 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 4 PTH免疫吸附剂的制备及性能评价 | 第56-70页 |
| ·绪论 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·材料和试剂 | 第56-57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-62页 |
| ·动物免疫 | 第57-58页 |
| ·Bradford法测定总蛋白含量 | 第58页 |
| ·IgY的分离提取 | 第58-59页 |
| ·IgY的特异性检测 | 第59页 |
| ·IgY的效价检测 | 第59-60页 |
| ·PTH免疫亲和柱的制备 | 第60-61页 |
| ·IgY的亲和纯化 | 第61页 |
| ·IgY免疫吸附剂的制备 | 第61-62页 |
| ·IgY免疫吸附剂对PTH的亲和常数测定 | 第62页 |
| ·IgY免疫吸附剂对PTH的去除效果评价 | 第62页 |
| ·IgY免疫吸附剂的特异性吸附评价 | 第62页 |
| ·实验结果与讨论 | 第62-69页 |
| ·IgY特异性检测 | 第62-63页 |
| ·免疫后特异性IgY效价变化测定 | 第63-64页 |
| ·硫酸铵沉淀纯化IgY条件优化 | 第64-66页 |
| ·IgY的亲和纯化 | 第66-67页 |
| ·IgY免疫吸附剂对PTH的亲和常数测定 | 第67-68页 |
| ·IgY免疫吸附剂对PTH的去除效果评价 | 第68页 |
| ·IgY免疫吸附剂的特异性吸附评价 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录A 重组蛋白PTH(1-84)氨基酸序列 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
