| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| ·血栓栓塞性疾病 | 第11-14页 |
| ·血栓形成的条件和机制 | 第11-13页 |
| ·血栓的形成与血栓的形态 | 第13-14页 |
| ·血栓的治疗 | 第14-18页 |
| ·抗凝血药 | 第14-15页 |
| ·抗血小板凝集药 | 第15-16页 |
| ·溶栓药物 | 第16-18页 |
| ·蚕蛾溶茧酶研究进展 | 第18-23页 |
| ·蚕蛾溶茧酶 | 第18页 |
| ·溶茧酶分泌器官的研究 | 第18-19页 |
| ·溶茧酶的生理生化特性 | 第19-20页 |
| ·溶茧酶酶原的研究 | 第20-22页 |
| ·溶茧酶基因的克隆与表达 | 第22-23页 |
| ·研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 天然柞蚕溶茧酶的分离纯化及酶学性质的表征 | 第24-40页 |
| ·实验材料和试剂 | 第24-25页 |
| ·材料和试剂 | 第24-25页 |
| ·实验仪器 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·溶液配制 | 第25-26页 |
| ·蚕蛹吐出液的收集 | 第26-27页 |
| ·柞蚕溶茧酶的分离纯化 | 第27页 |
| ·BCA法蛋白定量 | 第27-28页 |
| ·精氨酸酯酶活力的测定 | 第28-29页 |
| ·溶茧酶对纤维蛋白原和纤维蛋白的降解 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-38页 |
| ·CM-Sepharose FastFlow弱阳离子交换层析 | 第30-32页 |
| ·Sephadex G-50凝胶过滤层析 | 第32页 |
| ·BCA蛋白定量 | 第32-33页 |
| ·酶动力学参数的测定 | 第33-35页 |
| ·酶对纤维蛋白原和纤维蛋白的降解 | 第35-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 3 柞蚕溶茧酶基因的克隆与序列分析 | 第40-56页 |
| ·实验材料和试剂 | 第40-42页 |
| ·材料和试剂 | 第40-41页 |
| ·实验仪器 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-49页 |
| ·柞蚕蛹下颚腺RNA的提取 | 第42页 |
| ·3 ’RACE反应 | 第42-46页 |
| ·5 ’RACE反应 | 第46-48页 |
| ·溶茧酶基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·柞蚕溶茧酶基因生物信息学分析 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-54页 |
| ·柞蚕下颚腺总RNA的提取及检测 | 第49-50页 |
| ·柞蚕溶茧酶全长cDNA的克隆 | 第50-52页 |
| ·柞蚕溶茧酶基因的氨基酸序列分析 | 第52页 |
| ·多序列比对及系统发育树分析 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 4 柞蚕溶茧酶的原核表达和真核表达 | 第56-77页 |
| ·实验材料和试剂 | 第56-58页 |
| ·材料和试剂 | 第56-57页 |
| ·实验仪器与设备 | 第57页 |
| ·溶液配制 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-67页 |
| ·重组载体pGEX-6p-1-cocoonase的构建 | 第58-60页 |
| ·柞蚕溶茧酶基因的原核表达 | 第60页 |
| ·重组载体EGFP-pFastBacTM Dual-cocoonase的构建 | 第60-64页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体Bacmid的构建及鉴定 | 第64页 |
| ·重组杆状病毒在Sf9昆虫细胞中的表达 | 第64-65页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析及Western blotting检测 | 第65-67页 |
| ·表达产物的活性分析 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-76页 |
| ·重组载体pGEX-6p-1-cocoonase的鉴定 | 第67-68页 |
| ·重组载体EGFP-pFastBacTM Dual-cocoonase的鉴定 | 第68-72页 |
| ·重组Bacmid杆粒的鉴定 | 第72-73页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第73页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析及Western blotting检测 | 第73-75页 |
| ·表达产物的活性检测 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 5 天然溶茧酶的体内体外活性试验 | 第77-83页 |
| ·实验材料与试剂 | 第77-78页 |
| ·材料与试剂 | 第77页 |
| ·实验仪器 | 第77-78页 |
| ·实验方法 | 第78页 |
| ·细胞毒性实验 | 第78页 |
| ·出血活性实验 | 第78页 |
| ·溶血作用实验 | 第78页 |
| ·体内溶栓实验 | 第78页 |
| ·结果与分析 | 第78-81页 |
| ·细胞毒性实验 | 第79页 |
| ·出血活性实验 | 第79-80页 |
| ·体外、体内溶栓实验 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
