| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-25页 |
| ·甘蓝型油菜及其亲本物种的性状特征 | 第15页 |
| ·白菜型油菜的基本特征 | 第15页 |
| ·甘蓝的基本特征 | 第15页 |
| ·芸薹属的起源及其进化关系 | 第15-16页 |
| ·黄籽甘蓝型油菜的研究进展 | 第16-18页 |
| ·黄籽甘蓝型油菜的性状特征 | 第16-17页 |
| ·甘蓝型黄籽油菜种皮色泽的遗传学研究 | 第17-18页 |
| ·植物类黄酮生物合成途径的研究进展 | 第18-21页 |
| ·类黄酮类物质概述 | 第18-19页 |
| ·苯丙烷-类黄酮-花青素-原花青素的生物合成途径 | 第19-21页 |
| ·二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)及其研究进展 | 第21-25页 |
| ·DFR概述 | 第21-22页 |
| ·DFR基因的系统进化 | 第22页 |
| ·DFR的转基因与功能研究 | 第22-23页 |
| ·芸薹属花青素的研究 | 第23-25页 |
| 第2章 引言 | 第25-27页 |
| 第3章 材料与方法 | 第27-41页 |
| ·植物材料、载体和菌种 | 第27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌种及质粒 | 第27页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第27-28页 |
| ·核酸提取试剂及试剂盒 | 第27-28页 |
| ·基因克隆试剂及试剂盒 | 第28页 |
| ·半定量RT-PCR试剂盒 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·基因组总DNA的提取(CTAB法) | 第29页 |
| ·目的片段的PCR扩增体系 | 第29-30页 |
| ·BnDFR、BrDFR、BoDFR家族的重克隆和鉴定 | 第30-33页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族的电子克隆 | 第30页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族的扩增 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·目的片段的回收 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·目的片段与pGEM-T easy载体的连接 | 第32页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第32页 |
| ·转化子的蓝白菌落筛选及菌液PCR扩增鉴定 | 第32页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族潜在成员的筛选 | 第32-33页 |
| ·测序和生物信息学分析 | 第33页 |
| ·芸薹属DFR基因家族RNA干扰载体的构建 | 第33-35页 |
| ·干扰片段的克隆 | 第33-34页 |
| ·质粒提取 | 第34页 |
| ·载体骨架的制备和反义片段的插入 | 第34页 |
| ·中间载体的酶切和正义片段的插入 | 第34-35页 |
| ·RNAi载体转化根癌农杆菌 | 第35页 |
| ·RNA干扰载体转化黑籽甘蓝型油菜 | 第35页 |
| ·从再生植株筛选鉴定转基因植株 | 第35页 |
| ·再生植株的Basta复检 | 第35页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第35页 |
| ·转基因植株中BnDFR基因家族被抑制程度的RT-PCR检测 | 第35-38页 |
| ·总RNA提取和纯化(试剂盒法) | 第35-36页 |
| ·mRNA的反转录 | 第36-37页 |
| ·内标扩增 | 第37页 |
| ·转基因植株中BnDFR基因家族的半定量RT-PCR检测 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的性状鉴定 | 第38页 |
| ·转基因植株的背景性状调查 | 第38页 |
| ·转基因植株的目标性状调查 | 第38页 |
| ·BoDFR、BrDFR和BnDFR基因家族正义载体的构建 | 第38-41页 |
| ·从克隆载体上切下并回收芸薹属DFR基因家族保守片段 | 第38-39页 |
| ·植物表达载体骨架的准备 | 第39页 |
| ·重组、转化大肠杆菌和鉴定 | 第39页 |
| ·正义载体转化根癌农杆菌 | 第39-41页 |
| 第4章 结果与分析 | 第41-75页 |
| ·白菜、甘蓝、甘蓝型油菜基因组总DNA的提取 | 第41页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族各成员gDNA的克隆 | 第41-44页 |
| ·BrDFR基因家族基因组序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·BoDFR基因家族基因组序列的克隆 | 第42-43页 |
| ·BnDFR基因家族基因组序列的克隆 | 第43-44页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族的核酸序列分析 | 第44-45页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族的基因结构和核酸特征 | 第44-45页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族的同源性和进化关系 | 第45-57页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR基因家族编码蛋白的同源性 | 第57-60页 |
| ·芸薹属3个物种与拟南芥DFR蛋白同源性及系统进化分析 | 第57-58页 |
| ·BrDFR、BoDFR、BnDFR家族蛋白的亚细胞定位 | 第58页 |
| ·芸薹属DFR家族蛋白的二级结构预测 | 第58-60页 |
| ·BoDFR、BrDFR和BnDFR基因家族正义载体的构建 | 第60-63页 |
| ·从重组载体pMD19-T上切下DFR基因家族的正义片段 | 第60-61页 |
| ·植物表达载体pC2301M1BDP骨架的制备 | 第61页 |
| ·形成正义表达载体、转化和鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组载体转化根癌农杆菌与鉴定 | 第62-63页 |
| ·DFR基因家族干扰载体的构建 | 第63-65页 |
| ·干扰片段的克隆 | 第63页 |
| ·反义片段的插入——中间载体的构建 | 第63-64页 |
| ·正义片段的插入——RNA干扰载体的获得 | 第64-65页 |
| ·转化农杆菌及菌株的PCR检测 | 第65页 |
| ·RNA干扰载体转化黑籽甘蓝型油菜的研究 | 第65-68页 |
| ·遗传转化 | 第65-66页 |
| ·再生植株的Basta抗性检测结果 | 第66-68页 |
| ·再生植株的PCR鉴定 | 第68页 |
| ·花和种子RNA的提取和cDNA的获得 | 第68-70页 |
| ·转基因油菜花和种子总RNA的提取 | 第68-69页 |
| ·转基因植株总cDNA的获得 | 第69页 |
| ·转基因植株花和花后20d种子中BnDFR家族表达的半定量RT-PCR | 第69-70页 |
| ·转基因植株的性状调查 | 第70-75页 |
| 第5章 讨论 | 第75-79页 |
| ·BoDFR、BrDFR和BnDFR基因家族的成员数与"三倍化"假说 | 第75页 |
| ·从DFR分析白菜、甘蓝与甘蓝型油菜的亲缘关系 | 第75-76页 |
| ·转基因抑制DFR表达是创造新型甘蓝型黄籽油菜材料的重要方法 | 第76-77页 |
| ·对甘蓝型油菜遗传转化体系的因素探讨 | 第77-79页 |
| 第6章 结论 | 第79-83页 |
| ·重新克隆和鉴定了白菜、甘蓝、甘蓝型油菜DFR基因家族 | 第79页 |
| ·DFR基因位点证明了白菜、甘蓝与甘蓝型油菜的亲缘关系 | 第79页 |
| ·芸薹属DFR的进化关系和成员数 | 第79-80页 |
| ·构建了芸薹属DFR基因家族的正义载体 | 第80页 |
| ·构建了芸薹属DFR基因家族RNA干扰载体 | 第80页 |
| ·获得了RNAi转化后种皮色素减少的转基因甘蓝型油菜 | 第80页 |
| ·RNAi转化后抑制了甘蓝型油菜中DFR基因家族的表达 | 第80-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 缩略词 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 发表论文及参加科研一览表 | 第93页 |
