| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| ·芸薹属植物的起源与亲缘关系 | 第13-14页 |
| ·黄籽甘蓝型油菜的研究进展与育种中的问题 | 第14-16页 |
| ·类黄酮类物质生物合成途径的研究进展 | 第16-18页 |
| ·类黄酮物质的特点及在植物中的生理功能 | 第16页 |
| ·类黄酮物质生物合成途径 | 第16页 |
| ·类黄酮生物合成途径的分子生物学研究 | 第16-18页 |
| ·TT8的基因特征及研究进展 | 第18-21页 |
| 第二章 引言 | 第21-23页 |
| 第三章 材料与方法 | 第23-41页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第23-25页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第23-24页 |
| ·自配试剂和溶液 | 第24页 |
| ·主要试剂盒 | 第24-25页 |
| ·目的片段的亚克隆和测序 | 第25-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳与目的片段的胶回收 | 第25页 |
| ·胶回收的目的片段与T载体的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆子的筛选和菌液PCR检测 | 第26页 |
| ·质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·酶切 | 第27页 |
| ·测序与生物信息学分析 | 第27页 |
| ·核酸提取 | 第27-29页 |
| ·植株基因组总DNA的小量法快速提取 | 第27-28页 |
| ·植物材料总RNA的提取和纯化 | 第28-29页 |
| ·芸薹属TT8基因家族RNA干扰载体的构建 | 第29-30页 |
| ·干扰片段的扩增 | 第29-30页 |
| ·芸薹属TT8基因家族RNA干扰载体的构建与鉴定 | 第30页 |
| ·工程菌株的获得 | 第30页 |
| ·芸薹属TT8基因家族CRES-T载体的构建 | 第30-32页 |
| ·芸薹属TT8基因家族4条C-S-T片段的扩增 | 第31页 |
| ·芸薹属TT8基因家族的CRES-T片段的制备 | 第31-32页 |
| ·C-S-T植物表达载体骨架的准备 | 第32页 |
| ·重组、大肠杆菌转化和鉴定 | 第32页 |
| ·C-S-T载体转化根癌农杆菌菌株LBA4404 | 第32页 |
| ·RNA干扰和CRES-T载体转化甘蓝型油菜 | 第32-36页 |
| ·发无菌苗 | 第32-33页 |
| ·预培养 | 第33页 |
| ·浸染 | 第33页 |
| ·共培养 | 第33页 |
| ·洗外植体(杀农杆菌) | 第33-34页 |
| ·诱导抗性愈伤 | 第34页 |
| ·分化培养 | 第34页 |
| ·分化茎 | 第34页 |
| ·长茎 | 第34-35页 |
| ·生根 | 第35页 |
| ·驯化及移栽 | 第35页 |
| ·农杆菌转化组培过程中的玻璃化现象研究 | 第35-36页 |
| ·转基因再生植株分子检测与性状鉴定 | 第36-38页 |
| ·Basta 复检 | 第36页 |
| ·组织化学染色检测GUS活性 | 第36页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第36-37页 |
| ·再生植株T_1种籽粒色性状考察 | 第37页 |
| ·再生植株T_1种籽花青素与类黄酮含量的测定 | 第37页 |
| ·再生植株种子皮壳率的测定 | 第37-38页 |
| ·再生植株种子千粒重的测定 | 第38页 |
| ·再生植株结实率调查 | 第38页 |
| ·再生植株荚角长度调查 | 第38页 |
| ·再生植株分枝数调查 | 第38页 |
| ·转基因再生种子的体视显微镜观察 | 第38页 |
| ·转基因再生植株TT8基因家族的表达检测 | 第38-41页 |
| ·mRNA的反转录 | 第38-39页 |
| ·调Bn26S内标 | 第39页 |
| ·半定量RT-PCR检测转基因再生植株BnTT8基因家族的抑制水平 | 第39-41页 |
| 第四章 结果与分析 | 第41-67页 |
| ·芸薹属TT8基因家族RNA干扰载体的构建 | 第41-43页 |
| ·芸薹属TT8基因家族RNA干扰片段的克隆 | 第41页 |
| ·芸薹属TT8基因家族RNA干扰载体的构建 | 第41-42页 |
| ·重组载体转化根癌农杆菌及鉴定 | 第42-43页 |
| ·芸薹属TT8基因家族CRES-T载体的构建 | 第43-48页 |
| ·芸薹属TT8基因家族4条CRES-T片段的扩增 | 第43-46页 |
| ·从重组pMD19-T载体切下TT8家族的CRES-T片段 | 第46页 |
| ·植物表达载体pC2301M1SDPB和pC2301M1SMPB骨架的制备 | 第46页 |
| ·重组形成CRES-T载体、转化和鉴定 | 第46-48页 |
| ·RNA干扰和CRES-T载体转化甘蓝型油菜 | 第48-50页 |
| ·遗传转化 | 第48页 |
| ·不同因素对玻璃化现象的影响研究分析 | 第48-50页 |
| ·转基因再生植株分子检测与性状鉴定 | 第50-67页 |
| ·Basta复检结果 | 第50-51页 |
| ·组织化学染色检测GUS活性 | 第51-52页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第52-54页 |
| ·再生植株T_1种籽粒色性状考察 | 第54-56页 |
| ·再生植株T_1种籽种皮类黄酮和花青素含量的测定 | 第56-60页 |
| ·再生植株性状统计 | 第60-62页 |
| ·转基因再生种子的体视显微镜观察 | 第62页 |
| ·转基因再生植株TT8基因家族的表达检测 | 第62-67页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第67-73页 |
| ·成功构建了芸薹属TT8基因的RNA干扰和CRES-T载体 | 第67页 |
| ·获得了一批RNA干扰和CRES-T转基因油菜 | 第67页 |
| ·芸薹属TT8可能同时调控种皮色素积累和种皮结构发育 | 第67-68页 |
| ·芸薹属TT8还可能调控种胚发育,影响种胚性状和结实率 | 第68页 |
| ·操作芸薹属TT8的分子育种潜力与问题 | 第68-69页 |
| ·RNA干扰与C-S-T两种基因沉默方式的比较 | 第69-70页 |
| ·通过农杆菌介导法转化获得转基因再生植株以及试管苗玻璃化的问题 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 缩略词 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 发表论文与参与课题 | 第81页 |
