| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-19页 |
| ·类黄酮物质特点及其在植物中的生理生化功能 | 第15页 |
| ·类黄酮物质生物合成途径 | 第15-17页 |
| ·类黄酮生物合成途径的分子生物学研究进展 | 第15-17页 |
| ·TRANSPARENT TESTA5(TT5)基因特征及相关研究进展 | 第17-18页 |
| ·芸薹科植物的比较基因组学研究 | 第18-19页 |
| 第二章 引言 | 第19-21页 |
| 第三章 材料与方法 | 第21-43页 |
| ·菌株、载体和植物材料 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌株和载体 | 第21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| ·基本仪器设备 | 第21页 |
| ·PCR扩增及产物检测仪器 | 第21页 |
| ·细菌培养及亚克隆用仪器设备 | 第21-22页 |
| ·Southern杂交仪器 | 第22页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第22-23页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第22页 |
| ·配制试剂 | 第22-23页 |
| ·购买的试剂盒 | 第23页 |
| ·植物材料的种植及取样 | 第23-25页 |
| ·DNA材料 | 第23-24页 |
| ·RNA材料 | 第24页 |
| ·芸薹族材料基因组总DNA的粗提和纯化 | 第24-25页 |
| ·芸薹属材料总RNA的提取 | 第25页 |
| ·总RNA的提取 | 第25页 |
| ·去除总RNA中DNA | 第25页 |
| ·CHI基因家族的RACE | 第25-28页 |
| ·RACE末端扩增引物设计 | 第25-26页 |
| ·合成总cDNA的第一链 | 第26页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝CHI基因家族cDNA 5’末端的第一次扩增 | 第26-27页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝CHI基因家族cDNA 5’末端的第二次扩增 | 第27页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝CHI基因家族cDNA的3’末端一扩扩增 | 第27页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝CHI基因家族cDNA的3’末端第二次扩增 | 第27-28页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝CHI基因家族gDNA扩增 | 第28-29页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝CHI基因家族全长cDNA的扩增 | 第29页 |
| ·胶回收、亚克隆、质粒抽提、测序和引物合成 | 第29-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·目的片段胶回收 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌DH5α和JM109感受态的制备 | 第30页 |
| ·胶回收片段与丁载体连接 | 第30页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·重组转化子的蓝白斑筛选及菌液PCR鉴定 | 第31页 |
| ·转化重组子的质粒抽提 | 第31页 |
| ·测序及引物合成 | 第31页 |
| ·甘蓝CHI基因家族的Southern杂交分析 | 第31-34页 |
| ·探针制备 | 第31-32页 |
| ·基因组总DNA的限制性酶切消化 | 第32页 |
| ·Southern杂交凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·Southern杂交凝胶转膜及固定 | 第33页 |
| ·探针与尼龙膜的Southern杂交和检测 | 第33-34页 |
| ·剥离探针 | 第34页 |
| ·核酸和蛋白序列的结构和功能的生物信息学分析 | 第34页 |
| ·BnCHI、BrCHI和l BoCHI蛋白的系统发育分析 | 第34页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝CHI基因家族的RT-PCR分析 | 第34-37页 |
| ·RNA的反转录 | 第34-35页 |
| ·内标检测与cDNA浓度调节 | 第35页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜和甘蓝CHI基因半定量RT-PCR的引物和检测温度 | 第35-36页 |
| ·不同组织器官中CHI基因家族各成员表达模式的半定量RT-PCR检测 | 第36-37页 |
| ·CHI基因家族在黄、黑籽系间的表达差异性检测 | 第37页 |
| ·芸薹属CHI基因家族RNAi载体的构建 | 第37-39页 |
| ·RNAi载体构建所用引物 | 第37-38页 |
| ·芸薹属CHI基因家族RNAi片段的克隆 | 第38页 |
| ·载体骨架的制备和反义片段的插入 | 第38页 |
| ·中间载体的酶切和正义片段的插入 | 第38页 |
| ·RNAi载体转化根癌农杆菌 | 第38-39页 |
| ·芸薹属CHI基因家族正义植物表达载体的构建 | 第39页 |
| ·芸薹属CHI基因家族正义片段和植物表达载体骨架的制备 | 第39页 |
| ·正义植物表达载体的构建与鉴定 | 第39页 |
| ·甘蓝型油菜CHI基因家族RNAi载体的遗传转化 | 第39-41页 |
| ·发无菌苗 | 第39页 |
| ·预培养 | 第39-40页 |
| ·侵染与共培养 | 第40页 |
| ·杀农杆菌(洗外植体)与诱导抗性愈伤 | 第40页 |
| ·分化培养 | 第40-41页 |
| ·分化茎 | 第41页 |
| ·长茎 | 第41页 |
| ·生根 | 第41页 |
| ·驯化及移栽 | 第41页 |
| ·再生植株的分子检测和性状初步鉴定 | 第41-43页 |
| ·Basta复检 | 第41-42页 |
| ·PCR检测 | 第42页 |
| ·性状调查 | 第42-43页 |
| 第四章 结果与分析 | 第43-89页 |
| ·各器官组织总RNA的提取和总cDNA的获得 | 第43页 |
| ·白菜、甘蓝、甘蓝型油菜各器官组织RNA的提取 | 第43页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘蓝生殖器官RACE总cDNA的获得 | 第43页 |
| ·甘蓝型油菜、白菜、甘监基因组总DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·BrTT5、BoCHI、BnTT5基因家族gDNA的克隆 | 第44-45页 |
| ·白菜、甘监、甘蓝型油菜CHI基因家族全长cDNA的克隆 | 第45-47页 |
| ·BrTT5、BoTT5、BnCHI基因家族核酸水平的分析 | 第47-61页 |
| ·BrTT5、BoTT5、BnCHI基因家族的基因结构和核酸特征 | 第47-55页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI基因家族核苷酸水平同源性和进化关系 | 第55-61页 |
| ·芸薹属CHI基因家族编码蛋白的分析 | 第61-75页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI家族蛋白的基本参数 | 第61-62页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHl家族蛋白的同源性 | 第62-65页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI家族蛋白的保守区域和活性中心预测 | 第65页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI家族蛋白的翻译后修饰及拓扑学预测 | 第65-68页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI家族蛋白的二级结构预测 | 第68-69页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI家族蛋白的三级结构预测 | 第69-72页 |
| ·BnCHI、BrCHI和BoCHI蛋白的进化关系分析 | 第72-75页 |
| ·BoCHI基因家族可能的成员数 | 第75-76页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI基因家族的表达特征 | 第76-78页 |
| ·BrCHI基因家族的表达特征 | 第76-77页 |
| ·BoCHI基因家族的表达特征 | 第77页 |
| ·BnCHI基因家族成员的表达特征 | 第77-78页 |
| ·BrCHI、BoCHI、BnCHI基因家族在黑、黄籽间的表达差异性 | 第78-81页 |
| ·BrCHI基因家族在黑、黄籽材料中的表达差异分析 | 第78-79页 |
| ·BoCHS基因家族在黑、黄籽材料中的表达差异分析 | 第79-80页 |
| ·BnCHS基因家族在黑、黄籽材料中的表达差异分析 | 第80-81页 |
| ·芸薹属CHI基因家族RNAi载体的构建 | 第81-83页 |
| ·芸薹属CHI基因家族RNAi片段的克隆 | 第81页 |
| ·反义片段的插入——中间载体的构建 | 第81-82页 |
| ·正义片段的插入——RNA干扰载体的获得 | 第82页 |
| ·转化农杆菌及菌株的PCR检测 | 第82-83页 |
| ·CHI家族正义植物表达载体的构建 | 第83-84页 |
| ·转RNAi载体的再生植株的分子检测和性状调查 | 第84-89页 |
| ·再生植株的草甘膦(Basta)抗性复检结果 | 第84-85页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第85页 |
| ·再生植株的性状调查 | 第85-89页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第89-95页 |
| ·系统克隆了白菜、甘蓝、甘蓝型油菜CHI基因家族 | 第89页 |
| ·芸薹属CHI基因家族编码蛋白的特征 | 第89页 |
| ·从CHI位点分析甘蓝型油菜、白菜、甘蓝之间的亲缘关系 | 第89-90页 |
| ·芸薹属CHI基因家族经历了“三倍化”并进一步加倍 | 第90-91页 |
| ·芸薹属CHI基因家族器官特异性的保守和歧化 | 第91页 |
| ·本研究检测的芸薹属黄籽材料中CHI表达正常 | 第91-92页 |
| ·芸薹属CHI基因家族表现出了快速进化的特征 | 第92-93页 |
| ·RNAi转基因表明芸薹属CHI同时影响种皮色素、种子大小、侧枝数等性状 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第99页 |
