柑橘采后生防菌柠檬形克勒克酵母（34-9）遗传转化体系的建立
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| ·柑橘采后病害防治进展 | 第9-11页 |
| ·柑橘常见的微生物病害 | 第9页 |
| ·柑橘采后病害防治方法研究进展 | 第9-11页 |
| ·拮抗酵母菌的遗传改良 | 第11-14页 |
| ·酵母转化研究进展 | 第11-13页 |
| ·筛选标记 | 第13-14页 |
| ·酵母载体 | 第14页 |
| ·转移外源基因的技术 | 第14-17页 |
| ·原生质体转化 | 第15页 |
| ·LiAc法转化 | 第15-16页 |
| ·电转化 | 第16页 |
| ·转化机理研究 | 第16-17页 |
| ·PDC基因的研究 | 第17-19页 |
| ·PDC基因 | 第17-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-19页 |
| ·课题来源和意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-30页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·实验菌株与载体 | 第20页 |
| ·主要培养基 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·限制性内切酶和其他酶类 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-30页 |
| ·酵母总DNA的提取(大量) | 第21-22页 |
| ·引物合成 | 第22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·TA克隆 | 第23页 |
| ·PCR产物凝胶回收 | 第23页 |
| ·连接到pMD18-T载体 | 第23页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备和转化 | 第23页 |
| ·重组载体的构建 | 第23-25页 |
| ·重组质粒线性化 | 第25页 |
| ·转化实验 | 第25-27页 |
| ·敏感性检测 | 第25页 |
| ·LiAc法 | 第25-26页 |
| ·电转化 | 第26-27页 |
| ·原生质体转化 | 第27页 |
| ·对照实验 | 第27-28页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母 | 第28页 |
| ·转化子稳定性检测 | 第28页 |
| ·丙酮酸脱羧酶基因的克隆和在毕赤酵母中的表达 | 第28-30页 |
| ·重组子的表达 | 第29页 |
| ·酶活性检测 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-45页 |
| ·潮霉素B敏感性检测 | 第30-31页 |
| ·重组载体构建过程 | 第31-33页 |
| ·重组片段的扩增 | 第31页 |
| ·整合载体的构建 | 第31-33页 |
| ·重组质粒转化34-9 | 第33-38页 |
| ·LiAc转化法 | 第33-34页 |
| ·电转化方法 | 第34-36页 |
| ·原生质体转化 | 第36-37页 |
| ·其他方法的转化 | 第37-38页 |
| ·对照实验 | 第38-41页 |
| ·转化方法对照实验 | 第38-39页 |
| ·毕赤酵母对潮霉素B的敏感性检测 | 第39页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母 | 第39-40页 |
| ·重组载体转化毕赤酵母稳定性检测 | 第40-41页 |
| ·丙酮酸脱羧酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 | 第41-45页 |
| ·丙酮酸脱羧酶表达载体构建与鉴定 | 第41-44页 |
| ·重组质粒的转化 | 第44页 |
| ·酶活检测 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-50页 |
| ·载体的选择 | 第45-46页 |
| ·酵母遗传转化 | 第46-49页 |
| ·LiAc转化 | 第46页 |
| ·电击转化 | 第46-47页 |
| ·原生质体转化 | 第47-49页 |
| ·丙酮酸脱羧酶的表达 | 第49-50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
