| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| 1 弓形虫病原学国内外的研究情况 | 第13-15页 |
| 2 弓形虫病流行病学研究进展 | 第15-18页 |
| ·区域分布 | 第16页 |
| ·传播途径 | 第16-17页 |
| ·贮存宿主 | 第17页 |
| ·季节分布 | 第17页 |
| ·感染人群 | 第17-18页 |
| 3 弓形虫抗原基因的研究进展及在疾病诊断中的应用情况 | 第18-28页 |
| ·抗原基因的克隆与表达的研究进展 | 第18-28页 |
| 4 PCR技术在弓形虫病诊断中研究进展 | 第28-29页 |
| 5 芯片技术在弓形虫诊断中研究进展 | 第29-30页 |
| 6 弓形虫疫苗的研究进展 | 第30页 |
| 7 单克隆抗体技术在疾病诊断中的应用 | 第30-32页 |
| 8 弓形虫病在防治方面的研究进展 | 第32页 |
| 9 本研究目的及意义 | 第32-34页 |
| 第二章 弓形虫GRA3基因原核表达的研究 | 第34-55页 |
| 1 材料 | 第34-39页 |
| ·RH强度株 | 第34页 |
| ·主要材料 | 第34页 |
| ·试验所用溶液及其配制方法 | 第34-38页 |
| ·试验所需设备 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-45页 |
| ·弓形虫基因组DNA的制备 | 第39页 |
| ·目的基因的扩增 | 第39-40页 |
| ·目的基因的分离纯化 | 第40页 |
| ·编码的蛋白质的分析 | 第40页 |
| ·目的基因的克隆 | 第40-42页 |
| ·GRA3表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 3 结果 | 第45-51页 |
| ·目的基因的扩增结果 | 第45页 |
| ·基因的克隆与鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·目的基因编码的蛋白质的性质分析 | 第46-48页 |
| ·构建的表达载体的鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物的结果 | 第49-50页 |
| ·表达产物的溶解性分析 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 5 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 抗重组蛋白GRA3单克隆抗体的制备与分析 | 第55-73页 |
| 1 材料 | 第55-59页 |
| ·抗原 | 第55页 |
| ·细胞 | 第55页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-57页 |
| ·主要仪器 | 第57-58页 |
| ·技术路线 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-64页 |
| ·抗原制备 | 第59页 |
| ·动物免疫 | 第59-60页 |
| ·间接ELISA法检测免疫小鼠抗体效价 | 第60页 |
| ·细胞的制备与融合 | 第60-61页 |
| ·阳性克隆的筛选与克隆化 | 第61-62页 |
| ·腹水制备 | 第62页 |
| ·单克隆抗体核型的分析 | 第62-63页 |
| ·单克隆抗体的SDS-PAGE分析 | 第63页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第63页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第63页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-68页 |
| ·免疫动物的抗体效价测定 | 第64页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第64-65页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第65页 |
| ·5E4杂交瘤细胞株分泌的McAb的亚型鉴定结果 | 第65-66页 |
| ·腹水的效价检测结果 | 第66页 |
| ·5E4 McAb与重组GRA3蛋白反应结果 | 第66页 |
| ·McAb的Western-Blotting分析结果 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| 5 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 单抗双夹心ELISA检测方法的建立与初步应用 | 第73-84页 |
| 1 材料 | 第73-74页 |
| ·抗原 | 第73页 |
| ·抗体 | 第73页 |
| ·试验所用溶液的配制 | 第73-74页 |
| ·主要仪器及设备 | 第74页 |
| 2 方法 | 第74-78页 |
| ·单抗双夹心ELISA步骤 | 第74-75页 |
| ·鼠抗弓形虫IgG最适包被浓度及包被时间的确定 | 第75页 |
| ·蛋白抗原与McAb最佳包被条件的确定 | 第75页 |
| ·酶标二抗的最佳使用浓度及反应条件的确定 | 第75-76页 |
| ·封闭液的最佳工作时间确定 | 第76页 |
| ·底物显色液(OPD)的最适工作时间的确定 | 第76页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第76页 |
| ·交叉反应试验 | 第76页 |
| ·敏感性试验 | 第76-77页 |
| ·应用试验 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-82页 |
| ·单抗双夹心ELISA检测方法最佳反应体系及条件的筛选结果 | 第78-79页 |
| ·阴阳性临界值的确定 | 第79-80页 |
| ·交叉反应试验结果 | 第80页 |
| ·敏感性试验 | 第80-81页 |
| ·应用试验 | 第81-82页 |
| 4 讨论 | 第82-83页 |
| 5 小结 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第98页 |
