| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-30页 |
| ·文献综述 | 第14-28页 |
| ·植物应对低磷胁迫的适应机制 | 第14-17页 |
| ·植物磷营养相关基因的分离 | 第17-20页 |
| ·植物缺磷响应基因调控机制研究 | 第20-21页 |
| ·启动子 | 第21-27页 |
| ·分子诊断 | 第27-28页 |
| ·研究目的和意义 | 第28-30页 |
| ·研究意义 | 第28-29页 |
| ·研究目的 | 第29页 |
| ·研究内容 | 第29页 |
| ·技术路线 | 第29-30页 |
| 2 油菜缺磷诱导表达基因的分离和验证 | 第30-43页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·材料培养 | 第30-31页 |
| ·RNA提取(异硫氰酸胍法) | 第31-32页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·逆转录 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·PCR产物纯化 | 第33页 |
| ·载体连接 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-41页 |
| ·总RNA的提取 | 第35页 |
| ·油菜缺磷诱导表达基因的分离与验证 | 第35-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·同源序列法分离基因 | 第41页 |
| ·半定量RT-PCR检测基因差异表达 | 第41页 |
| ·缺磷诱导表达基因的用途 | 第41-43页 |
| 3 油菜BnSPX3 基因的序列、进化和表达分析 | 第43-60页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-49页 |
| ·材料培养 | 第44页 |
| ·DNA和RNA提取 | 第44-45页 |
| ·BnSPX3 3’端cDNA序列的克隆 | 第45-46页 |
| ·BnSPX3 5’端cDNA序列的克隆 | 第46页 |
| ·BnSPX3基因组DNA序列的克隆 | 第46-47页 |
| ·BrSPX3和BoSPX3的克隆 | 第47页 |
| ·RT-PCR | 第47-48页 |
| ·定量RT-PCR | 第48-49页 |
| ·生物信息学分析 | 第49页 |
| ·标记基因表达分析 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-59页 |
| ·BnSPX3全长cDNA的克隆 | 第49-50页 |
| ·BnSPX3的序列分析 | 第50-52页 |
| ·BnSPX3的基因结构分析 | 第52-53页 |
| ·BnSPX3；1和BnSPX3；2来源基因组分析 | 第53页 |
| ·BnSPX3基因的进化分析 | 第53-54页 |
| ·BnSPX3在不同胁迫条件下的表达分析 | 第54-56页 |
| ·BnSPX3在缺磷和恢复供磷过程中的表达分析 | 第56-57页 |
| ·BnSPX3在不同磷浓度下的表达分析 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·BnSPX3与AtSPX3、OsSPX3的比较 | 第59页 |
| ·BnSPX3是判断植物缺磷状况的理想标记基因 | 第59-60页 |
| 4 油菜BnIPS1基因的序列、进化和表达分析 | 第60-73页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| ·材料培养 | 第60页 |
| ·DNA和RNA提取 | 第60-61页 |
| ·BnIPS1 3’端cDNA序列的克隆 | 第61页 |
| ·BnIPS1 5’端cDNA序列的克隆 | 第61-62页 |
| ·BnIPS1基因组DNA序列的克隆 | 第62页 |
| ·BrIPS1和BoIPS1的克隆 | 第62-63页 |
| ·RT-PCR | 第63页 |
| ·定量RT-PCR | 第63页 |
| ·生物信息学分析 | 第63-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-70页 |
| ·BnIPS1全长cDNA的克隆 | 第64页 |
| ·BnIPS1的序列分析 | 第64-65页 |
| ·BnIPS1；1和BnIPS1；2来源基因组分析 | 第65页 |
| ·BnIPS1与同源基因的序列比较 | 第65-66页 |
| ·BnIPS1在不同胁迫条件下的表达分析 | 第66-67页 |
| ·BnIPS1在缺磷和恢复供磷过程中的表达分析 | 第67-69页 |
| ·BnIPS1在不同磷浓度下的表达分析 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-73页 |
| ·BnIPS1属于TPSl1/Mt4基因家族 | 第70-71页 |
| ·TPSI1/Mt4家族基因不具有缺磷诱导表达的特异性 | 第71-72页 |
| ·BnIPS1在磷营养研究中的用途 | 第72-73页 |
| 5 BnSPX3启动子的分离、表达及调控分析 | 第73-97页 |
| ·实验材料 | 第73-74页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·菌株和质粒 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-81页 |
| ·土培拟南芥 | 第74页 |
| ·BnSPX3启动子的克隆 | 第74-75页 |
| ·BnSPX3启动子的生物信息学分析 | 第75页 |
| ·BnSPX3启动子表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第76页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第76-77页 |
| ·拟南芥转化 | 第77-78页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第78页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第78页 |
| ·转基因拟南芥的胁迫处理 | 第78-79页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第79页 |
| ·BnSPX3；2启动子缺失载体构建 | 第79-80页 |
| ·GUS表达分析 | 第80页 |
| ·突变体phr1的鉴定 | 第80页 |
| ·标记基因表达分析 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-94页 |
| ·BnSPX3启动子的序列分析 | 第81-83页 |
| ·BnSPX3启动子转基因拟南芥的获得 | 第83-85页 |
| ·BnSPX3启动子对不同胁迫的响应分析 | 第85-90页 |
| ·不同长度BnSPX3；2启动子对缺磷的响应 | 第90-92页 |
| ·BnSPX3；2启动子受AtPHR1调控 | 第92-94页 |
| ·讨论 | 第94-97页 |
| ·BnSPX3启动子受多种转录因子调控 | 第94-95页 |
| ·BnSPX3启动子活性分析 | 第95页 |
| ·BnSPX3；2启动子-746至-327区域可能存在全新的顺式作用元件 | 第95页 |
| ·BnSPX3启动子可以应用于植物基因工程 | 第95-97页 |
| 6 BnIPS1启动子的分离及表达分析 | 第97-106页 |
| ·实验材料 | 第97页 |
| ·实验方法 | 第97-99页 |
| ·土培拟南芥 | 第97页 |
| ·BnIPS1启动子的克隆 | 第97-98页 |
| ·BnIPS1启动子的生物信息学分析 | 第98页 |
| ·BnIPS1；1启动子表达载体的构建 | 第98-99页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第99页 |
| ·拟南芥转化 | 第99页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第99页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第99页 |
| ·转基因拟南芥的胁迫处理 | 第99页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第99页 |
| ·结果与分析 | 第99-105页 |
| ·BnIPS1启动子的序列分析 | 第99-102页 |
| ·BnIPS1；1启动子转基因拟南芥的获得 | 第102-103页 |
| ·BnIPS1；1启动子对不同元素缺乏的响应分析 | 第103-105页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| ·BnIPS1；1启动子可以用于油菜缺磷信号转导研究 | 第105页 |
| ·BnIPS1；1启动子可以应用于植物基因工程 | 第105-106页 |
| 7 总结与展望 | 第106-110页 |
| ·总结 | 第106-108页 |
| ·主要创新点 | 第108-109页 |
| ·不足之处 | 第109页 |
| ·下一步的工作设想 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 个人简介 | 第123页 |
| 研究成果 | 第123页 |
