| 目录 | 第1-8页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 棉花纤维细胞起始及伸长的研究进展 | 第15-36页 |
| ·棉花纤维的物质组成与产量构成 | 第15-16页 |
| ·有关棉花纤维原始细胞分化的几种假说 | 第16-18页 |
| ·在棉花纤维发育过程中起重要作用基因的发掘与验证 | 第18-27页 |
| ·纤维发育相关基因发掘与功能验证的一般思路 | 第19-23页 |
| ·目的基因在棉花纤维中的特异表达与定位 | 第20页 |
| ·利用不同基因型材料间性状差异与基因表达的关联分析筛选基因 | 第20-21页 |
| ·棉花纤维的离体培养 | 第21-22页 |
| ·通过目的基因的遗传转化来进行功能验证 | 第22-23页 |
| ·已发掘或验证的部分纤维发育相关基因 | 第23-27页 |
| ·蔗糖合酶基因(Sus) | 第23-24页 |
| ·细胞骨架(Cytoskeleton)相关基因 | 第24-25页 |
| ·油菜素内酯合成与响应相关基因 | 第25-26页 |
| ·一些转录因子 | 第26-27页 |
| ·棉花纤维发育相关DNA/PROTEIN-PROTEIN间的相互作用 | 第27-28页 |
| ·棉花纤维发育相关代谢路径 | 第28-31页 |
| ·乙烯(Ethylene)与超长链饱和脂肪酸(VLCFAs)合成通路 | 第28-29页 |
| ·果胶质(Pectin)合成途径 | 第29页 |
| ·活性氧清除相关路径 | 第29-30页 |
| ·碳源的合成、转运与分配 | 第30-31页 |
| ·棉花纤维细胞伸长模式与机制 | 第31页 |
| ·棉种驯化改变纤维发育过程中的基因调控网络及生物学进程 | 第31-32页 |
| ·表皮原因子(PROTODERMALFACTOR,PDF)相关研究进展 | 第32-35页 |
| ·本研究目的、意义及技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 棉花中PDF1基因的克隆、结构及表达分析 | 第36-51页 |
| ·实验材料与方法 | 第36-40页 |
| ·实验用植物材料 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·棉花基因组DNA的提取与Southern杂交 | 第36页 |
| ·棉花各组织RNA的提取、荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)及Northern杂交 | 第36-37页 |
| ·棉花中PDF1基因DNA全长序列的分离克隆 | 第37-38页 |
| ·核苷酸与蛋白质的序列分析 | 第38-39页 |
| ·利用Genome-Walking技术扩增棉花中PDF1基因的3’-UTR区 | 第39页 |
| ·H_2O_2及DPI在纤维离体培养条件下对PDF1基因表达丰度的影响 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-51页 |
| ·二倍体野生棉花及四倍体栽培棉种中PDF1基因的拷贝数分析 | 第40-41页 |
| ·海岛棉3-79及陆地棉TM-1中PDF1基因序列的获得与比较分析 | 第41-44页 |
| ·海岛棉3-79及陆地棉TM-1中PDF1基因3’-UTR区序列的比较分析 | 第44页 |
| ·不同棉种间PDF1的亲缘关系分析 | 第44-45页 |
| ·不同物种间PDF1的亲缘关系分析 | 第45-48页 |
| ·棉花中PDF1基因的表达特性分析 | 第48-51页 |
| 第三章 棉花中PDF1基因的功能及作用机制初步分析 | 第51-85页 |
| ·实验方法 | 第51-65页 |
| ·CaMV35S：GbPDF1超量表达载体的构建 | 第51-53页 |
| ·棉花PDF1基因干涉表达载体的构建 | 第53页 |
| ·棉花下胚轴的转化与检测 | 第53-55页 |
| ·棉花下胚轴的转化 | 第53页 |
| ·转基因材料Southern杂交 | 第53页 |
| ·棉花各组织RNA的抽提、荧光定量PCR和Northern杂交 | 第53-54页 |
| ·野生型与转基因干涉植株胚珠蛋白水平上PDF1的表达分析 | 第54-55页 |
| ·转基因与野生型棉花胚珠的扫描电镜比较分析 | 第55-56页 |
| ·转基因植株及野生型对照胚珠H_2O_2含量的测定 | 第56页 |
| ·以GbPDF1为诱饵通过酵母双杂交筛选互作蛋白 | 第56-59页 |
| ·GbPDF1诱饵载体的构建 | 第56页 |
| ·以GbPDF1为诱饵筛库 | 第56-58页 |
| ·重新转化进一步确定GbPDF1的互作蛋白 | 第58-59页 |
| ·双分子荧光互补实验进一步验证蛋白质互作的可靠性 | 第59-60页 |
| ·CaMV35S：GbPDF1-G3GFP融合表达载体的构建 | 第60页 |
| ·拟南芥的转化与检测 | 第60-62页 |
| ·拟南芥的转化 | 第61页 |
| ·拟南芥T1代阳性植株的筛选与鉴定 | 第61-62页 |
| ·CaMV35S：GbPDF1-G3GFP载体瞬时转化烟草叶片 | 第62-63页 |
| ·CaMV35S：GbPDF1-G3GFP载体稳定转化烟草 | 第63-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-81页 |
| ·在棉花中超量表达GbPDFl不能正常分化成苗 | 第65-66页 |
| ·干涉PDF1表达抑制棉花纤维的起始 | 第66-72页 |
| ·干涉PDF1影响棉花纤维发育相关基因网络 | 第72-74页 |
| ·GbPDF1相互作用蛋白质的分离 | 第74-78页 |
| ·GbPDF1的亚细胞定位 | 第78-79页 |
| ·烟草中超量表达GbPDF1增加初生根长度 | 第79-81页 |
| ·讨论 | 第81-85页 |
| ·适当调整改变目的基因表达丰度的策略 | 第81-82页 |
| ·棉花纤维起始过程中PDF1的功能及其可能的作用机制 | 第82-85页 |
| 第四章 棉花中PDF1基因的转录调控分析 | 第85-106页 |
| ·实验方法 | 第85-93页 |
| ·GbPDF1启动子的克隆与顺式元件分析 | 第85-86页 |
| ·引物延伸实验确定GbPDF1的转录起始位点 | 第86-87页 |
| ·启动子表达载体构建 | 第87-89页 |
| ·PGbPDF1-1及PGbPDF1-2驱动报告基因GUS的表达载体构建 | 第87页 |
| ·启动子PGbPDF1-1系列缺失表达载体的构建 | 第87-88页 |
| ·启动子顺式元件突变表达载体构建 | 第88-89页 |
| ·启动子驱动GUS报告基因的表达载体转化材料的表达特性分析 | 第89-90页 |
| ·启动子表达载体转化棉花下胚轴及转化子的检测 | 第89页 |
| ·启动子表达载体转化拟南芥及转化子的检测 | 第89页 |
| ·组织化学染色定性分析GUS活性 | 第89-90页 |
| ·石蜡切片 | 第90页 |
| ·GUS蛋白定量分析 | 第90页 |
| ·凝胶阻滞验证DNA与核蛋白的体外互作 | 第90-93页 |
| ·拟南芥及棉花组织核蛋白的提取 | 第90-92页 |
| ·寡聚核昔酸探针的同位素标记 | 第92-93页 |
| ·寡聚核苷酸探针与核蛋白的体外互作及检测 | 第93页 |
| ·结果与分析 | 第93-104页 |
| ·GbPDF1基因的启动子的克隆与序列分析 | 第93-95页 |
| ·GbPDF1核心启动子区的确定 | 第95-100页 |
| ·GbPDF1核心顺式元件的确定 | 第100-104页 |
| ·讨论 | 第104-106页 |
| ·GbPDF1与AtPDF1转录调控关键元件的不一致性 | 第104-105页 |
| ·与HDZIP2ATATHB2互作蛋白的相关研究 | 第105-106页 |
| 小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 附录 | 第119-123页 |
| 在读期间所发表的学术论文 | 第123页 |
| 申请专利 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
