| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 缩略词中英文对照 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-38页 |
| 1．1 钙调蛋白的研究历史进展 | 第9-16页 |
| 1．1．1 钙调蛋白的发现 | 第10页 |
| 1．1．2 钙调蛋白的理化特点 | 第10-12页 |
| 1．1．3 钙调蛋白的功能 | 第12-14页 |
| 1．1．4 植物CaM的基因结构及其多型性 | 第14页 |
| 1．1．5 植物中CaM及CaM相关基因的表达动力学 | 第14-16页 |
| 1．2 胞质钙信号的研究进展 | 第16-25页 |
| 1．2．1 钙离子成为胞内信使的基础 | 第17页 |
| 1．2．2 细胞的钙转移系统 | 第17-22页 |
| 1．2．3 钙信号的研究方法进展 | 第22-23页 |
| 1．2．4 钙离子瞬时改变对植物的调控异质性 | 第23-25页 |
| 1．3 植物遗传转化的研究进展 | 第25-31页 |
| 1．3．1 植物遗传转化现状概述 | 第25-26页 |
| 1．3．2 品质改良基因工程研究 | 第26-27页 |
| 1．3．3 调控生长发育的基因工程研究 | 第27-28页 |
| 1．3．4 生产医用蛋白的基因工程研究 | 第28-29页 |
| 1．3．5 生产工业原料的基因工程研究 | 第29页 |
| 1．3．6 抗非生物胁迫基因工程研究 | 第29-30页 |
| 1．3．7 抗病虫害基因工程研究 | 第30-31页 |
| 1．4 绿色荧光蛋白的研究现状 | 第31-36页 |
| 1．4．1 绿色荧光蛋白的生化特性和发光机理 | 第32-33页 |
| 1．4．2 绿色荧光蛋白的改造 | 第33-34页 |
| 1．4．3 绿色荧光蛋白在植物中的应用 | 第34-36页 |
| 1．5 本研究的目的与意义 | 第36-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-51页 |
| 2．1 材料 | 第38页 |
| 2．2 甜菊钙调蛋白基因的克隆、表达载体的构建及诱导表达 | 第38-44页 |
| 2．2．1 甜菊总RNA的提取与纯化 | 第38页 |
| 2．2．2 RNA的甲醛变性电泳 | 第38页 |
| 2．2．3 甜菊cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| 2．2．4 PCR体外扩增 | 第39页 |
| 2．2．5 PCR扩增产物的纯化 | 第39页 |
| 2．2．6 DNA连接反应 | 第39-40页 |
| 2．2．7 E．coli感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2．2．8 连接产物转化E．coli感受态细胞 | 第40页 |
| 2．2．9 重组子克隆的筛选鉴定 | 第40页 |
| 2．2．10 质粒的小量提取 | 第40-41页 |
| 2．2．11 限制性内切酶酶切 | 第41页 |
| 2．2．12 原核表达载体PLC的构建 | 第41页 |
| 2．2．13 表达产物的诱导 | 第41-42页 |
| 2．2．14 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第42页 |
| 2．2．15 苯基-琼脂糖（phenyl-sepharose）疏水亲和层析 | 第42页 |
| 2．2．16 RCaM-1的提纯 | 第42-43页 |
| 2．2．17 花椰菜钙调蛋白的纯化 | 第43页 |
| 2．2．18 小鼠抗花椰菜钙调蛋白血清的制备 | 第43页 |
| 2．2．19 蛋白质斑点杂交 | 第43-44页 |
| 2．2．20 Western Blot分析 | 第44页 |
| 2．3 盐胁迫对甜菊钙离子浓度的影响 | 第44-45页 |
| 2．3．1 甜菊愈伤组织的培养 | 第44页 |
| 2．3．2 原生质体的制备 | 第44页 |
| 2．3．3 原生质体活性的测定 | 第44-45页 |
| 2．3．4 Fluo-3／AM负载条件的确定 | 第45页 |
| 2．3．5 激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）测定时样品处理 | 第45页 |
| 2．3．6 Ca~（2+）浓度变化的LSCM测定 | 第45页 |
| 2．4 绿色荧光蛋白植物双元表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 2．4．1 GFP-mut2基因的PCR扩增 | 第46页 |
| 2．4．2 中间载体pBΩG的构建 | 第46页 |
| 2．4．3 植物双元表达载体1301pBΩG的构建 | 第46页 |
| 2．4．4 双元质粒载体转化农杆菌 | 第46-47页 |
| 2．5 绿色荧光蛋白基因转化甜菊愈伤组织 | 第47-51页 |
| 2．5．1 甜菊再生系统的优化 | 第47页 |
| 2．5．2 甜菊HYG基础抗性的测定 | 第47页 |
| 2．5．3 农杆菌法转化 | 第47-48页 |
| 2．5．4 转化体的筛选 | 第48页 |
| 2．5．5 转化体的鉴定 | 第48-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-87页 |
| 3．1 甜菊钙调蛋白基因的克隆、结构分析及表达 | 第51-67页 |
| 3．1．1 甜菊钙调蛋白基因的RT-PCR扩增 | 第51页 |
| 3．1．2 PCR扩增产物的克隆和重组子的鉴定 | 第51-53页 |
| 3．1．3 甜菊钙调蛋白的基因序列及相应的氨基酸序列比较分析 | 第53-54页 |
| 3．1．4 RCaM-1原核表达载体PLC的构建 | 第54-55页 |
| 3．1．5 甜菊CaM在大肠杆菌中的诱导表达 | 第55-60页 |
| 3．1．6 讨论 | 第60-67页 |
| 3．2 盐胁迫对甜菊钙离子浓度的影响 | 第67-73页 |
| 3．2．1 原生质体存活率的测定 | 第67页 |
| 3．2．2 不同条件对Fluo-3／AM导入甜菊愈伤组织原生质体的影响 | 第67-68页 |
| 3．2．3 不同浓度NaCl对甜菊愈伤组织原生质体[Ca~（2+）]_（cyt）变化的影响 | 第68-69页 |
| 3．2．4 LiCl和肌醇预处理对NaCl诱导[Ca~（2+）]_（cyt）改变的影响 | 第69页 |
| 3．2．5 原生质体外无Ca~（2+）时NaCl对[Ca~（2+）]_（cyt）的影响 | 第69-70页 |
| 3．2．6 讨论 | 第70-73页 |
| 3．3 绿色荧光蛋白植物双元表达载体的构建 | 第73-75页 |
| 3．3．1 GFP-mut2的PCR扩增 | 第73页 |
| 3．3．2 中间载体pBΩG的构建 | 第73页 |
| 3．3．3 植物双元表达载体1301pBΩG的构建 | 第73-74页 |
| 3．3．4 双元质粒载体转化农杆菌 | 第74页 |
| 3．3．5 讨论 | 第74-75页 |
| 3．4 绿色荧光蛋白基因转化甜菊愈伤组织 | 第75-87页 |
| 3．4．1 甜菊再生系统的建立及优化 | 第75-76页 |
| 3．4．2 筛选剂的选择和基础抗性的测定 | 第76-77页 |
| 3．4．3 农杆菌转化条件的优化 | 第77-79页 |
| 3．4．4 转化体的筛选 | 第79-80页 |
| 3．4．5 外源基因整合及表达检测结果 | 第80-83页 |
| 3．4．6 讨论 | 第83-87页 |
| 4 结论及展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 附录 | 第99-100页 |
| 英文摘要 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
