中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-9页 |
前言 | 第9-61页 |
一、 发光海洋生物研究概况 | 第10-11页 |
二、 海洋生物的发光体系 | 第11-14页 |
三、 多管水母发光系统的研究进展 | 第14-36页 |
3.1 光蛋白(aequorin) | 第14-20页 |
3.2 多管水母的绿色荧光蛋白 | 第20-36页 |
四、 珊瑚虫的荧光蛋白 | 第36-38页 |
五、 本研究的目的和意义 | 第38-40页 |
材料和方法 | 第40-61页 |
结果 | 第61-111页 |
一、 发光水母的形态 | 第61页 |
二、 aeqxm和aeqxxm基因的分离和理化性质初步研究 | 第61-68页 |
2.1 aeqxm基因的分离 | 第61-62页 |
2.2 aeqxxm基因的分离 | 第62-65页 |
2.3 aeqxm、aeqxxm推测的氨基酸序列的分析 | 第65页 |
2.4 apoaeqxm和apoaeqxxm蛋白在E.coli中的表达 | 第65-67页 |
2.5 再生时间、NaCl浓度、pH和温度对Aeqxm、Aeqxxm再生的影响 | 第67-68页 |
三、 GFPxm基因的分离及荧光性质研究 | 第68-80页 |
3.1 GFPxm DNA的分离 | 第69-71页 |
3.2 GFPxm cDNA的分离 | 第71-72页 |
3.3 融合GFPxm在大肠杆菌中的表达 | 第72-75页 |
3.4 非融合GFPxm在大肠杆菌中的表达 | 第75页 |
3.5 GFPxm的纯化和荧光性质测定 | 第75-79页 |
3.6 GFPxm推测的氨基酸序列 | 第79-80页 |
四、 GFPxm的基因改造 | 第80-107页 |
4.1 GFPxm第64-66位氨基酸的定点随机突变 | 第80-92页 |
4.1.1 三种突变型蛋白的获得 | 第82页 |
4.1.2 三种突变型蛋白在E.coli中的表达 | 第82-83页 |
4.1.3 三种突变型蛋白的纯化和量子产率测定 | 第83-87页 |
4.1.4 GFPxm16、GFPxm18、GFPxm19的荧光稳定性初步测定 | 第87-92页 |
4.1.5 GFPxm16、GFPxm18、GFPxm19的核苷酸序列及推测的氨基酸序列 | 第92页 |
4.2 DNA shuffling突变 | 第92-95页 |
4.3 采用定点突变技术对GFPxm突变型的66、69和203位氨基酸进行突变 | 第95-102页 |
4.3.1 对GFPxm19的第66和69位氨基酸进行突变 | 第95-97页 |
4.3.2 对GFPxm16、GFPxm18、GFPxm19、ShG24的第203位氨基酸进行突变 | 第97-102页 |
4.4 表达温度和时间对GFPxm突变型荧光强度的影响 | 第102-107页 |
4.4.1 表达温度对GFPxm突变型荧光强度的影响 | 第102-106页 |
4.4.2 表达时间对GFPxm突变型荧光强度的影响 | 第106-107页 |
五、 GFPxm突变型在哺乳动物细胞中的表达 | 第107-111页 |
讨论 | 第111-119页 |
一、 Aeqxm和Aeqxxm基因及理化性质 | 第111-112页 |
二、 大型多管水母绿色荧光蛋白基因的分离及蛋白荧光光谱 | 第112-113页 |
三、 GFPxm突变型 | 第113-117页 |
四、 表达温度和表达时间对GFPxm突变型荧光强度的影响 | 第117-119页 |
小结 | 第119-121页 |
参考文献 | 第121-140页 |
科研及成果 | 第140-141页 |
附录 | 第141-142页 |
致谢 | 第142页 |