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多管水母的发光系统——绿色荧光蛋白的改造及其初步应用研究

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-9页
前言第9-61页
 一、 发光海洋生物研究概况第10-11页
 二、 海洋生物的发光体系第11-14页
 三、 多管水母发光系统的研究进展第14-36页
  3.1 光蛋白(aequorin)第14-20页
  3.2 多管水母的绿色荧光蛋白第20-36页
 四、 珊瑚虫的荧光蛋白第36-38页
 五、 本研究的目的和意义第38-40页
 材料和方法第40-61页
结果第61-111页
 一、 发光水母的形态第61页
 二、 aeqxm和aeqxxm基因的分离和理化性质初步研究第61-68页
  2.1 aeqxm基因的分离第61-62页
  2.2 aeqxxm基因的分离第62-65页
  2.3 aeqxm、aeqxxm推测的氨基酸序列的分析第65页
  2.4 apoaeqxm和apoaeqxxm蛋白在E.coli中的表达第65-67页
  2.5 再生时间、NaCl浓度、pH和温度对Aeqxm、Aeqxxm再生的影响第67-68页
 三、 GFPxm基因的分离及荧光性质研究第68-80页
  3.1 GFPxm DNA的分离第69-71页
  3.2 GFPxm cDNA的分离第71-72页
  3.3 融合GFPxm在大肠杆菌中的表达第72-75页
  3.4 非融合GFPxm在大肠杆菌中的表达第75页
  3.5 GFPxm的纯化和荧光性质测定第75-79页
  3.6 GFPxm推测的氨基酸序列第79-80页
 四、 GFPxm的基因改造第80-107页
  4.1 GFPxm第64-66位氨基酸的定点随机突变第80-92页
   4.1.1 三种突变型蛋白的获得第82页
   4.1.2 三种突变型蛋白在E.coli中的表达第82-83页
   4.1.3 三种突变型蛋白的纯化和量子产率测定第83-87页
   4.1.4 GFPxm16、GFPxm18、GFPxm19的荧光稳定性初步测定第87-92页
   4.1.5 GFPxm16、GFPxm18、GFPxm19的核苷酸序列及推测的氨基酸序列第92页
  4.2 DNA shuffling突变第92-95页
  4.3 采用定点突变技术对GFPxm突变型的66、69和203位氨基酸进行突变第95-102页
   4.3.1 对GFPxm19的第66和69位氨基酸进行突变第95-97页
   4.3.2 对GFPxm16、GFPxm18、GFPxm19、ShG24的第203位氨基酸进行突变第97-102页
  4.4 表达温度和时间对GFPxm突变型荧光强度的影响第102-107页
   4.4.1 表达温度对GFPxm突变型荧光强度的影响第102-106页
   4.4.2 表达时间对GFPxm突变型荧光强度的影响第106-107页
 五、 GFPxm突变型在哺乳动物细胞中的表达第107-111页
讨论第111-119页
 一、 Aeqxm和Aeqxxm基因及理化性质第111-112页
 二、 大型多管水母绿色荧光蛋白基因的分离及蛋白荧光光谱第112-113页
 三、 GFPxm突变型第113-117页
 四、 表达温度和表达时间对GFPxm突变型荧光强度的影响第117-119页
小结第119-121页
参考文献第121-140页
科研及成果第140-141页
附录第141-142页
致谢第142页

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