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中华蜜蜂(Apis cerana cerana)MsrA基因的克隆及其表达分析

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
1 前言第11-17页
   ·蜜蜂抗氧化基因研究进展第11-12页
   ·蜜蜂体内的主要抗氧化酶第12-13页
   ·甲硫氨酸亚砜还原酶(Msrs)的研究进展第13-16页
     ·甲硫氨酸亚砜还原酶(Msrs)家族分类第13-14页
     ·甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)的催化还原机制第14-15页
     ·MsrA 的功能研究第15-16页
   ·本课题研究的目的及意义第16-17页
2 材料与方法第17-36页
   ·实验材料第17-19页
     ·动物材料第17页
     ·动物材料的处理第17页
     ·菌株与质粒第17页
     ·酶与各种生化试剂第17页
     ·PCR 引物及反应条件第17-19页
   ·实验方法第19-35页
     ·蜜蜂总RNA 的提取及检测第19页
     ·cDNA 全长序列的获得第19-23页
     ·蜜蜂总DNA 的提取及纯化第23-24页
     ·AccMsrA 全长基因组序列的获得第24页
     ·AccMsrA基因启动子的分离第24-27页
     ·目的片段的回收第27-28页
     ·目的片段与克隆载体的连接第28页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备第28页
     ·大肠杆菌感受态细胞的转化第28-29页
     ·质粒DNA 的提取第29页
     ·对重组质粒的鉴定第29-30页
     ·实时荧光定量PCR 检测目的基因的表达第30-31页
     ·原核表达及抗体制备第31-34页
     ·免疫组化第34-35页
   ·数据处理第35-36页
3 结果与分析第36-50页
   ·中华蜜蜂甲硫氨酸亚砜还原酶A 基因的分离第36-38页
     ·中华蜜蜂RNA 的提取及反转录第36页
     ·AccMsrA 中间片段的分离第36-37页
     ·AccMsrA 5′片段的分离第37页
     ·AccMsrA 3′片段的分离第37-38页
     ·AccMsrA 全长cDNA 的分离第38页
   ·AccMsrA 的序列分析第38-45页
     ·AccMsrA 的全长cDNA 分析第38-41页
     ·AccMsrA 编码的蛋白质序列分析第41-42页
     ·AccMsrA 基因组及启动子序列分析第42-45页
   ·AccMsrA 基因在不同发育阶段及组织中的表达特性分析第45-46页
   ·AccMsrA 基因在不同环境胁迫下的表达分析第46-47页
   ·AccMsrA 基因的原核诱导表达及抗体制备第47-48页
   ·6 日龄幼虫体内AccMsrA 蛋白定位第48-50页
4 讨论第50-53页
   ·AccMsrA 基因的序列特征第50-51页
   ·AccMsrA 可能参抵抗环境胁迫第51页
   ·AccMsrA 可能参与发育调节第51-53页
5 结论第53-54页
参考文献第54-60页
致谢第60-61页
攻读学位期间发表论文情况第61-62页
硕士学位论文内容简介及自评第62页

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