HLA-A33分子的体外表达及鉴定
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 1. 前言 | 第12-35页 |
| ·HLA 研究现状 | 第12-30页 |
| ·HLA 简述 | 第12-13页 |
| ·HLA 分类 | 第13-14页 |
| ·HLA 分型技术 | 第14-21页 |
| ·血清学分型技术 | 第15-16页 |
| ·细胞学分型技术 | 第16页 |
| ·D NA 分型技术 | 第16-21页 |
| ·HLA 与疾病的关系 | 第21-24页 |
| ·HLA 的功能 | 第24-28页 |
| ·临床研究现状 | 第28-30页 |
| ·HLA 与HBV 感染 | 第30-32页 |
| ·HLA 与EV71 感染 | 第32-33页 |
| ·慢病毒系统 | 第33-35页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第35页 |
| 2. 材料与方法 | 第35-56页 |
| ·材料及试剂 | 第35-36页 |
| ·常用试剂及耗材 | 第35-36页 |
| ·仪器设备 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-56页 |
| ·HLA-A33 原核表达载体的构建 | 第36-43页 |
| ·优化HLA-A33 基因 | 第37-38页 |
| ·设计鉴定引物 | 第38页 |
| ·扩增目的基因片段HLA-A33 | 第38页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第38-39页 |
| ·构建pET28a-A33 克隆 | 第39-42页 |
| ·重组克隆pET28a-A33 的鉴定 | 第42页 |
| ·目的基因片段HLA-A33 在原核细胞内表达 | 第42-43页 |
| ·构建稳定表达HLA-A33 细胞系 | 第43-53页 |
| ·HLA-A33 基因的优化 | 第43-44页 |
| ·HLA-A33 基因的鉴定和PCR 扩增 | 第44-45页 |
| ·HLA-A33 序列鉴定 | 第45-47页 |
| ·构建稳定表达HLA-A33 基因的细胞系 | 第47-53页 |
| ·HLA-A33 分子与EV71 相互作用的蛋白 | 第53-56页 |
| ·易感细胞的鉴定 | 第53-54页 |
| ·病毒的扩增及纯化 | 第54页 |
| ·病毒滴度的测定（TCID50 法） | 第54-55页 |
| ·EV71 病毒感染RD-A33 细胞 | 第55页 |
| ·免疫共沉淀 | 第55-56页 |
| ·蛋白质银染 | 第56页 |
| ·质谱分析 | 第56页 |
| 3. 实验结果 | 第56-68页 |
| ·原核表达HLA-A33 | 第56-58页 |
| ·HLA-A33 基因片段扩增 | 第56-57页 |
| ·构建pET28a-A33 表达载体 | 第57-58页 |
| ·诱导表达HLA-A33 | 第58页 |
| ·构建HLA-A33 稳定细胞系 | 第58-65页 |
| ·PCR 扩增HLA-A33 基因 | 第58页 |
| ·PCR 产物回收 | 第58-59页 |
| ·连接产物转化 | 第59页 |
| ·阳性克隆PCR 鉴定 | 第59-61页 |
| ·质粒双酶切 | 第61-62页 |
| ·连接反应 | 第62页 |
| ·假病毒包装 | 第62-63页 |
| ·RD 细胞puro 抗性浓度筛选 | 第63页 |
| ·构建稳定细胞系 | 第63页 |
| ·WB 检测目的蛋白表达 | 第63-64页 |
| ·IF 检测目的蛋白表达 | 第64-65页 |
| ·HLA-A33 与EV71 的相互作用 | 第65-68页 |
| ·RD 细胞的易感性鉴定 | 第65页 |
| ·纯化后的EV71 病毒滴度的测定 | 第65-66页 |
| ·EV71 感染RD-A33 细胞 | 第66-67页 |
| ·CoIP 凝胶银染 | 第67-68页 |
| 4. 讨论 | 第68-71页 |
| ·HLA-A33 原核细胞的表达 | 第69页 |
| ·HLA-A33 真核表达 | 第69-71页 |
| 5. 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 个人简介及攻读学位期间发表论文 | 第83-84页 |
| 附件 | 第84页 |
