| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| ·脂肪细胞和脂滴概述 | 第13-14页 |
| ·脂肪细胞和脂滴的结构特点 | 第13页 |
| ·脂滴的形成—内质网合成模型 | 第13-14页 |
| ·脂滴是一个动态的细胞器 | 第14页 |
| ·PAT 家族蛋白 | 第14-18页 |
| ·PAT 家族蛋白的分类 | 第14-15页 |
| ·PAT 家族蛋白的生物学功能 | 第15-16页 |
| ·PAT 家族蛋白与脂滴合成 | 第16页 |
| ·PAT 家族蛋白与脂肪分解 | 第16-18页 |
| ·PAT 家族蛋白与基因调控 | 第18页 |
| ·PPARγ的研究进展 | 第18-20页 |
| ·PPARγ的结构及特征 | 第19页 |
| ·PPARγ的配基和功能 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-42页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·蜜蜂 | 第21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第21页 |
| ·PCR 引物 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-42页 |
| ·中华蜜蜂总RNA 的提取及检测 | 第23-24页 |
| ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA | 第23页 |
| ·甲醛变性凝胶进行RNA 电泳 | 第23-24页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第24页 |
| ·cDNA 回收纯化 | 第24-25页 |
| ·cDNA 的5′加尾反应 | 第25页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第25-28页 |
| ·AccLSD-1 中间片段的获得 | 第25-26页 |
| ·RACE 法获得5′端序列 | 第26-27页 |
| ·RACE 获得3′端序列 | 第27-28页 |
| ·cDNA 全长序列的获得 | 第28页 |
| ·电泳目的片段的回收 | 第28-29页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第30页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第30-33页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第30-31页 |
| ·大量提取质粒DNA | 第31-32页 |
| ·试剂盒质粒微量提取方案 | 第32-33页 |
| ·对重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·AccLSD-1 全长基因组序列的获得 | 第33-35页 |
| ·EasyPureTM Genomic DNA 试剂盒法提取基因组总DNA | 第33-34页 |
| ·总DNA 提取产物的纯化 | 第34-35页 |
| ·AccLSD-1 基因启动子的克隆 | 第35-36页 |
| ·AccLSD-1 基因启动子的反向PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·上游启动子序列的分析 | 第36页 |
| ·荧光定量PCR 检测不同发育时期AccLSD-1m RNA 的表达 | 第36-37页 |
| ·总RNA 的提取 | 第36页 |
| ·反转录cDNA 第一条链的合成 | 第36-37页 |
| ·荧光定量PCR 检测的反应体系和反应条件 | 第37页 |
| ·数据处理 | 第37页 |
| ·共轭亚油酸和罗格列酮对AccLSD-1 表达的影响 | 第37-38页 |
| ·不同浓度的共轭亚油酸或罗格列酮对AccLSD-1 表达的影响 | 第37-38页 |
| ·室内人工饲养 | 第38页 |
| ·荧光定量PCR 检测 | 第38页 |
| ·共轭亚油酸和罗格列酮的混合物对LSD-1 表达的影响 | 第38页 |
| ·室内人工饲养 | 第38页 |
| ·荧光定量PCR 检测 | 第38页 |
| ·原核表达及抗体制备 | 第38-42页 |
| ·实验试剂配制 | 第38-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第39页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第39-40页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·抗体的制备 | 第41页 |
| ·抗血清效价的测定（试管微量沉淀法） | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-55页 |
| ·中华蜜蜂AccLSD-1 基因的克隆 | 第42-45页 |
| ·总RNA 的提取及反转录 | 第42页 |
| ·AccLSD-1 基因中间片段的分离 | 第42-43页 |
| ·AccLSD-1 3′片段的分离 | 第43页 |
| ·AccLSD-1 5′片段的分离 | 第43-44页 |
| ·AccLSD-1 全长cDNA 的分离 | 第44-45页 |
| ·AccLSD-1 基因序列分析 | 第45-51页 |
| ·AccLSD-1cDNA 全长序列分析 | 第45-46页 |
| ·AccLSD-1 编码蛋白质序列分析 | 第46-49页 |
| ·AccLSD-1 基因组的克隆及其结构分析 | 第49页 |
| ·AccLSD-1 启动子序列的克隆及序列分析 | 第49-51页 |
| ·AccLSD-1 的表达特性分析 | 第51-53页 |
| ·AccLSD-1 在中华蜜蜂不同的发育时期的表达特性 | 第51-52页 |
| ·共轭亚油酸和罗格列酮对AccLSD-1 表达的影响 | 第52-53页 |
| ·AccLSD-1 基因的原核诱导表达及抗体制备 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| ·AccLSD-1 基因结构特征 | 第55页 |
| ·AccLSD-1 基因启动子序列分析 | 第55-56页 |
| ·AccLSD-1 在中华蜜蜂不同发育时期的表达特性分析 | 第56页 |
| ·添加共轭亚油酸和罗格列酮对AccLSD-1 表达量的影响 | 第56-57页 |
| ·AccLSD-1 基因的原核表达和抗体制备 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第67-68页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第68页 |
