| 原创性声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-4页 |
| 目录 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 缩略词 | 第15-17页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-30页 |
| 1 铁蛋白的结构 | 第19-21页 |
| 2 铁蛋白基因的种类 | 第21页 |
| 3 铁蛋白的分布 | 第21页 |
| 4 植物铁蛋白的功能 | 第21-23页 |
| ·铁蛋白在植物铁平衡中的作用 | 第21-22页 |
| ·铁蛋白在植物发育中的作用 | 第22页 |
| ·铁蛋白在植物对胁迫反应中的作用 | 第22-23页 |
| ·铁蛋白是一种普遍存在的胁迫反应蛋白 | 第22页 |
| ·铁蛋白与生物胁迫 | 第22页 |
| ·铁蛋白与非生物胁迫 | 第22-23页 |
| 5 植物铁蛋白的合成调节 | 第23-24页 |
| 6 铁蛋白基因的克隆 | 第24-26页 |
| 7 铁蛋白的转基因应用 | 第26-28页 |
| ·粮食作物的转基因应用 | 第26-27页 |
| ·园艺作物的转基因应用 | 第27页 |
| ·其它植物 | 第27-28页 |
| 8 结语 | 第28-30页 |
| 第二章 苹果铁蛋白基因和启动子的克隆及表达特性研究 | 第30-52页 |
| 1 材料与方法 | 第31-39页 |
| ·植物材料 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·总DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·DNA的检测与定量 | 第32页 |
| ·总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·总RNA中DNA的消化 | 第33页 |
| ·基因保守片段的克隆 | 第33-34页 |
| ·3'RACE | 第34-35页 |
| ·5'RACE | 第35页 |
| ·Southern blotting检测 | 第35-38页 |
| ·RT-PCR定量检测 | 第38页 |
| ·启动子的克隆 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-49页 |
| ·苹果ferritin基因的克隆 | 第39-46页 |
| ·苹果ferritin基因保守片段的克隆 | 第40页 |
| ·3'RACE | 第40-41页 |
| ·5'RACE | 第41页 |
| ·苹果ferritin基因全长cDNA的克隆 | 第41页 |
| ·苹果ferritin基因组序列及特征分析 | 第41-43页 |
| ·氨基酸序列的同源性分析 | 第43-45页 |
| ·基因组DNA的Southern blotting分析 | 第45-46页 |
| ·苹果铁蛋白基因的表达特性 | 第46页 |
| ·苹果铁蛋白基因启动子的克隆 | 第46-49页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第46-47页 |
| ·启动子目的条带的扩增 | 第47页 |
| ·启动子序列的分析 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 梨铁蛋白基因和启动子的克隆 | 第52-71页 |
| 1 材料与方法 | 第53-56页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·总DNA的提取 | 第53页 |
| ·DNA的检测与定量 | 第53页 |
| ·总RNA的提取 | 第53页 |
| ·总RNA中DNA的消化 | 第53页 |
| ·ferritin基因保守片段的克隆 | 第53-54页 |
| ·3'RACE | 第54页 |
| ·5'RACE | 第54-55页 |
| ·Southern blotting检测 | 第55页 |
| ·启动子的克隆 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-69页 |
| ·梨ferritin基因保守片段的克隆 | 第56页 |
| ·3'RACE | 第56-57页 |
| ·5'RACE | 第57页 |
| ·梨ferritin基因全长cDNA的克隆 | 第57-62页 |
| ·梨铁蛋白基因组序列及特征分析 | 第62页 |
| ·氨基酸序列的同源性分析 | 第62-65页 |
| ·基因组DNA的Southern杂交分析 | 第65页 |
| ·启动子目的条带的扩增 | 第65-66页 |
| ·启动子序列的分析 | 第66-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 第四章 超声波介导菜豆铁蛋白基因转化苹果的研究 | 第71-79页 |
| 1 材料与方法 | 第71-74页 |
| ·植物材料 | 第71页 |
| ·质粒DNA | 第71-72页 |
| ·化学试剂和仪器 | 第72页 |
| ·质粒的DNA提取 | 第72-73页 |
| ·超声波转化 | 第73页 |
| ·转化愈伤组织的筛选 | 第73页 |
| ·PCR扩增目标DNA | 第73页 |
| ·Southern blotting检测 | 第73-74页 |
| ·RT-PCR检测 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-77页 |
| ·超声强度和时间对转化的影响 | 第74页 |
| ·转菜豆铁蛋白基因苹果植株的获得 | 第74-75页 |
| ·PCR检测 | 第75页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第75-76页 |
| ·Southern blotting检测 | 第76-77页 |
| ·RT-PCR检测 | 第77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 转菜豆铁蛋白基因的苹果植株的分子鉴定 | 第79-86页 |
| 1 材料与方法 | 第79-82页 |
| ·植物材料 | 第79页 |
| ·化学试剂 | 第79页 |
| ·转基因株系和非转基因株系继代所用的培养基 | 第79-80页 |
| ·菌种和质粒 | 第80-81页 |
| ·质粒的DNA提取 | 第81页 |
| ·PCR检测 | 第81页 |
| ·PCR-Southern杂交检测 | 第81页 |
| ·Southern blotting检测 | 第81页 |
| ·RT-PCR检测 | 第81-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-85页 |
| ·PCR检测 | 第82页 |
| ·PCR-Southern blotting检测 | 第82-83页 |
| ·基因组DNA的酶切 | 第83页 |
| ·Southern blotting检测 | 第83-84页 |
| ·RT-PCR检测 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-86页 |
| 第六章 铁蛋白基因在转基因苹果基因组中的表达特性研究 | 第86-94页 |
| 1 材料与方法 | 第87-89页 |
| ·材料 | 第87页 |
| ·方法 | 第87-89页 |
| ·总DNA和RNA的提取 | 第87页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测 | 第87-88页 |
| ·外源铁蛋白基因在不同转基因株系茎段中的转录表达检测 | 第88页 |
| ·铁蛋白基因的铁诱导转录表达检测 | 第88页 |
| ·铁蛋白基因在转基因植株不同部位的转录表达检测 | 第88-89页 |
| 2 结果与分析 | 第89-92页 |
| ·转基因植株基因组中外源铁蛋白基因的表达检测 | 第89-91页 |
| ·RT-PCR产物特异性检验 | 第89-90页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第90页 |
| ·外源菜豆铁蛋白基因cDNA相对定量 | 第90-91页 |
| ·在铁诱导条件下的铁蛋白基因的转录表达特性 | 第91-92页 |
| ·铁蛋白基因在转基因植株不同部位的转录表达特性 | 第92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| 第七章 转菜豆铁蛋白基因番茄植株的分子鉴定及表达研究 | 第94-99页 |
| 1 材料与方法 | 第94-95页 |
| ·植物材料 | 第94页 |
| ·化学试剂 | 第94页 |
| ·菌种和质粒 | 第94页 |
| ·转化植株的分子鉴定 | 第94-95页 |
| ·转基因番茄植株的PCR检测 | 第95页 |
| ·PCR-Southern blotting检测 | 第95页 |
| ·Southern blotting检测 | 第95页 |
| ·RT-PCR检测 | 第95页 |
| ·转基因植株铁、锌、锰含量的测定 | 第95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-97页 |
| ·PCR检测 | 第95-96页 |
| ·PCR-Southern blotting检测 | 第96页 |
| ·Southern blotting检测 | 第96页 |
| ·RT-PCR检测 | 第96-97页 |
| ·转基因番茄组织中的铁、锌、锰含量的变化 | 第97页 |
| 3 讨论 | 第97-99页 |
| 全文讨论 | 第99-105页 |
| 1 苹果、梨铁蛋白基因的序列比较和功能预测 | 第99-101页 |
| ·铁蛋白基因的克隆 | 第99页 |
| ·铁蛋白基因的序列比较与功能预测 | 第99-100页 |
| ·铁蛋白基因启动子的克隆 | 第100-101页 |
| 2 在转基因植株中影响铁蛋白基因表达的因素 | 第101-103页 |
| ·转化方法对外源基因表达的影响 | 第101页 |
| ·外源基因插入的拷贝数与表达的关系 | 第101-102页 |
| ·外源基因和内源基因的同源性与表达的关系 | 第102页 |
| ·外源基因的铁诱导表达特性 | 第102-103页 |
| ·启动子对铁蛋白基因表达的影响 | 第103页 |
| ·不同种类铁蛋白基因的表达特性 | 第103页 |
| 3 今后进一步研究方向 | 第103-105页 |
| 全文结论 | 第105-106页 |
| 创新点 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-115页 |
| 附录 | 第115-124页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
