| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 缩写说明 | 第10-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-22页 |
| 1. 猪传染性胃肠炎病毒特征和基因结构与功能 | 第16-19页 |
| ·TGEV形态学特征 | 第16-17页 |
| ·病理变化发病机理 | 第17-18页 |
| ·TGEV的分子生物学特征 | 第18-19页 |
| ·TGEV的基因组成 | 第18页 |
| ·TGEV的四种结构蛋白 | 第18-19页 |
| 2. 减毒沙门氏菌的研究进展 | 第19-20页 |
| ·减毒沙门氏菌的入侵机制 | 第19页 |
| ·减毒沙门氏菌递呈疫苗的优缺点 | 第19-20页 |
| 3. 白细胞介素6对免疫的促进作用 | 第20页 |
| 4. 双顺反子系统 | 第20-21页 |
| 5. 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 TGEV S基因和pIL-6基因的双顺反子真核表达质粒的构建 | 第22-42页 |
| 1. 材料 | 第22-23页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·试剂配制 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| 2. 方法 | 第23-35页 |
| ·TGEV S基因T-A克隆载体的构建 | 第23-26页 |
| ·TGEV S基因特异性引物设计 | 第23-24页 |
| ·TGEV S基因质粒(pMD19T-S)菌的复苏及其提取 | 第24页 |
| ·TGEV S基因的PCR扩增 | 第24页 |
| ·TGEV S基因扩增产物的电泳鉴定 | 第24页 |
| ·TGEV S基因目的片段凝胶回收与纯化 | 第24页 |
| ·大肠杆菌(DH5α)感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·TGEV S基因与T载体的连接 | 第25页 |
| ·连接产物转化DH5 α感受态 | 第25页 |
| ·TGEV S基因T-A克隆载体鉴定 | 第25-26页 |
| ·TGEV S基因真核表达质粒pVAXD-S构建 | 第26-28页 |
| ·TGEV S基因T-A与真核表达载体pVAXD-S的酶切 | 第26-27页 |
| ·TGEV S基因与真核表达质粒pVAXD的连接 | 第27页 |
| ·TGEV S基因真核表达质粒pVAXD-S的鉴定 | 第27-28页 |
| ·pIL-6基因T-A克隆载体的构建 | 第28-30页 |
| ·pIL-6基因特异性引物设计 | 第28页 |
| ·pIL-6基因保存菌(pMD19T-IL)复苏及提取 | 第28-29页 |
| ·pIL-6基因的PCR扩增 | 第29页 |
| ·pIL-6目的片段的凝胶回收与纯化 | 第29页 |
| ·pIL-6基因与T载体的连接 | 第29-30页 |
| ·连接产物转化DH5 α感受态细胞 | 第30页 |
| ·pIL-6基因T-A克隆载体的鉴定 | 第30页 |
| ·TGEV S基因真核表达质粒pVAXD-S-IL6的构建 | 第30-32页 |
| ·真核表达载体pVAXD-S与pIL-6基因T-A克隆载体的酶切 | 第30-31页 |
| ·pIL-6基因与真核表达质粒pVAXD-S连接 | 第31-32页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-S-IL6的鉴定 | 第32页 |
| ·TGEV S基因与pIL-6基因体外表达 | 第32-35页 |
| ·转染用质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·细胞转染 | 第33-34页 |
| ·转染细胞RT-PCR检测 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第34-35页 |
| 3. 结果与分析 | 第35-39页 |
| ·TGEV S基因T-A克隆载体的构建 | 第35-36页 |
| ·TGEV S基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·TGEV S基因T-A克隆载体鉴定 | 第36页 |
| ·TGEV S基因真核表达质粒pVAXD-S的鉴定 | 第36页 |
| ·pIL-6基因T-A克隆载体的构建 | 第36-37页 |
| ·pIL-6基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·pIL-6基因T-A克隆载体的鉴定 | 第37页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-S-IL6的鉴定 | 第37-38页 |
| ·TGEV S基因与pIL-6基因体外表达 | 第38-39页 |
| ·TGEV S基因与pIL-6基因体外表达RT-PCR检测 | 第38-39页 |
| ·TGEV S基因真核表达质粒pVAXD-S-IL6的构建 | 第39页 |
| 4. 讨论 | 第39-40页 |
| 5. 结论 | 第40-42页 |
| 第三章 减毒沙门氏菌携带TGEV S基因和pIL-6基因DNA疫苗口服免疫研究 | 第42-62页 |
| 1. 材料 | 第42-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·试验动物 | 第42页 |
| ·试剂配制 | 第42-44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 2. 方法 | 第45-51页 |
| ·TGEV Sbc蛋白的表达与纯化 | 第45-46页 |
| ·重组菌pET32a-Sbc BL21(DE3)复苏与鉴定 | 第45页 |
| ·菌株TGEV Sbc的表达与SDS-PAGE | 第45页 |
| ·表达产物TGEV Sbc蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·减毒沙门氏菌SL7207感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·真核表达质粒电转化进入减毒沙门氏菌SL7207 | 第47页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的鉴定 | 第47页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的稳定性试验 | 第47-48页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的免疫安全性试验 | 第48页 |
| ·重组沙门氏菌免疫原性试验 | 第48-49页 |
| ·免疫小鼠γ-干扰素的检测 | 第49-50页 |
| ·免疫小鼠脾细胞的制备及蛋白刺激 | 第49-50页 |
| ·免疫小鼠γ-干扰素的检测 | 第50页 |
| ·TGEV特异性血清IgG检测 | 第50-51页 |
| ·特异性肠道IgA检测 | 第51页 |
| ·减毒沙门氏菌特异性血清IgG检测 | 第51页 |
| ·特异性肠道IgA检测 | 第51页 |
| 3. 结果与分析 | 第51-60页 |
| ·TGEV S_(bc)蛋白的表达与纯化 | 第51-53页 |
| ·重组质粒pET32a-Sbc PCR与双酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·TGEV Sbc重组蛋白表达与纯化SDS-PAGE | 第52-53页 |
| ·重组沙门氏菌的构建 | 第53-54页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的稳定性试验 | 第54页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的免疫安全性试验 | 第54-55页 |
| ·免疫小鼠γ-干扰素的检测 | 第55-56页 |
| ·TGEV特异性血清IgG检测 | 第56-57页 |
| ·TGEV特异性血清肠道IgA检测 | 第57-58页 |
| ·减毒沙门氏菌特异性血清IgG检测 | 第58-59页 |
| ·减毒沙门氏菌特异性肠道IgA检测 | 第59-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-61页 |
| 5. 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录(一) 质粒图谱 | 第70-71页 |
| 附录(二) 基因测序图 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
