| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-23页 |
| 1 刺参(Apostichopus japonicus)概述 | 第13页 |
| 2 刺参对温度适应的研究 | 第13-14页 |
| ·温度对刺参生长的影响 | 第13-14页 |
| ·温度对刺参夏眠和冬眠的影响研究 | 第14页 |
| 3 抑制性消减杂交技术 | 第14-18页 |
| ·SSH产生背景 | 第14-15页 |
| ·抑制性消减杂交原理 | 第15-16页 |
| ·抑制消减杂交技术操作步骤 | 第16-18页 |
| ·分组和cDNA合成 | 第17页 |
| ·四碱基限制酶酶切 | 第17页 |
| ·接头的设计和连接 | 第17页 |
| ·第一次消减杂交 | 第17页 |
| ·第二次消减杂交 | 第17-18页 |
| ·两轮抑制PCR | 第18页 |
| ·SSH技术的优缺点 | 第18页 |
| 4 SSH在水产动物研究中的应用 | 第18-21页 |
| ·在水产动物免疫基因克隆中的应用 | 第19-20页 |
| ·在水产动物发育生物学中的应用 | 第20-21页 |
| ·在筛选抗性个体差异表达基因研究中的应用 | 第21页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第一章 刺参高温胁迫消减cDNA文库的构建与分析 | 第23-43页 |
| 1 材料与方法 | 第23-35页 |
| ·实验样品 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·刺参高温胁迫致死温度 | 第24页 |
| ·高温胁迫和组织预处理 | 第24页 |
| ·刺参组织总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·mRNA的纯化 | 第25页 |
| ·mRNA的浓缩 | 第25-26页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第26-32页 |
| ·第一条cDNA链的合成 | 第26页 |
| ·第二条cDNA链的合成 | 第26-27页 |
| ·cDNA Rsa Ⅰ酶切 | 第27-28页 |
| ·接头连接 | 第28-29页 |
| ·第一次杂交 | 第29页 |
| ·第二次杂交 | 第29-30页 |
| ·第一轮PCR | 第30-31页 |
| ·第二轮PCR | 第31-32页 |
| ·消减效率的检测 | 第32页 |
| ·差减文库克隆 | 第32-33页 |
| ·PCR鉴定差减文库的克隆插入片段大小 | 第33页 |
| ·斑点杂交 | 第33-35页 |
| ·点膜 | 第33-34页 |
| ·探针标记及纯化 | 第34页 |
| ·预杂交和杂交 | 第34-35页 |
| ·洗膜 | 第35页 |
| ·阳性克隆序列测序 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-39页 |
| ·刺参高温胁迫致死温度 | 第35页 |
| ·刺参混合组织总RNA的提取及mRNA的纯化 | 第35-36页 |
| ·差减文库的构建 | 第36-37页 |
| ·cDNA Rsa Ⅰ酶切 | 第36页 |
| ·消减效率的检测 | 第36-37页 |
| ·消减cDNA文库的构建 | 第37页 |
| ·斑点杂交 | 第37-38页 |
| ·序列分析 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-42页 |
| ·抑制性消减杂交分离差异表达基因 | 第39页 |
| ·上调表达的基因 | 第39-40页 |
| ·下调表达的基因 | 第40-42页 |
| 小结 | 第42-43页 |
| 第二章 差减基因在刺参不同组织中相对表达丰度的研究 | 第43-53页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·实验样品 | 第43-44页 |
| ·总RNA提取 | 第44页 |
| ·逆转录合成cDNA模板 | 第44页 |
| ·Real-time PCR | 第44-46页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·real-time PCR反应体系 | 第45-46页 |
| ·real-time PCR引物特异性验证 | 第46页 |
| ·数据分析 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-51页 |
| ·RNA提取与反转录 | 第46-47页 |
| ·引物特异性检测 | 第47-49页 |
| ·组织中基因的相对表达丰度 | 第49-51页 |
| ·种基因在常温下刺参各组织中的表达量 | 第49-50页 |
| ·种基因在高温胁迫前后的各组织中表达量的变化 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 差减基因在不同胁迫温度下表达差异的研究 | 第53-58页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| ·实验样品 | 第53页 |
| ·总RNA的提取 | 第53页 |
| ·逆转录合成cDNA模板 | 第53-54页 |
| ·Real-time PCR | 第54页 |
| ·数据分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-55页 |
| ·RNA提取与反转录 | 第54页 |
| ·不同温度胁迫下的刺参SSH基因的表达 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 胁迫过程中差减基因的表达特点 | 第58-62页 |
| 1 材料与方法 | 第58-59页 |
| ·实验样品 | 第58页 |
| ·总RNA的提取 | 第58页 |
| ·逆转录合成cDNA模板 | 第58页 |
| ·Real-time PCR | 第58页 |
| ·数据分析 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-60页 |
| ·RNA提取与反转录 | 第59页 |
| ·高温胁迫过程中SSH基因的表达特点 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 已完成文章 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |