| 第1章 绪论 | 第1-43页 |
| 1 Bt的研究进展 | 第20-22页 |
| ·Bt的杀虫机理 | 第20-21页 |
| ·Bt基因工程 | 第21-22页 |
| 2 昆虫对Bt抗性的研究进展 | 第22-34页 |
| ·抗性的发展及其特点 | 第22-25页 |
| ·产生抗性的途径 | 第25页 |
| ·与抗性相关的Bt毒素主要受体 | 第25-33页 |
| ·其它抗性相关因素 | 第33-34页 |
| 3 昆虫离体培养细胞在Bt及其抗性研究中的应用 | 第34页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 5 本研究的技术路线 | 第35-37页 |
| 6 参考文献 | 第37-43页 |
| 第2章 粉纹夜蛾细胞系TnH5.对Cry1Ac毒素的抗性特点 | 第43-55页 |
| 1 材料与方法 | 第43-48页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·质粒、Bt杀虫晶体蛋白毒素和菌株 | 第43-44页 |
| ·化学农药 | 第44页 |
| ·昆虫细胞 | 第44页 |
| ·主要仪器和化学试剂 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-48页 |
| ·cry1Ac和cry1C基因的表达 | 第44-45页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白毒素的制备 | 第45-46页 |
| ·昆虫细胞TnH5的抗性选择、抗性诱导与抗性测定 | 第46-47页 |
| ·抗性稳定性的测定 | 第47页 |
| ·交互抗性的测定 | 第47页 |
| ·酯酶同工酶分析 | 第47-48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-52页 |
| ·Cry1Ac和Cry1C基因在大肠杆菌中的表达 | 第48页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白毒素的制备结果 | 第48-49页 |
| ·TnH5细胞对Cry1Ac的抗性发展 | 第49-50页 |
| ·TnH5细胞对Cry1Ac的抗性稳定性及其抗性恢复 | 第50-51页 |
| ·Cry1Ac选择细胞的交互抗性 | 第51页 |
| ·敏抗两种细胞的酯酶同工酶分析结果 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53页 |
| 5 参考文献 | 第53-55页 |
| 第3章 粉纹夜蛾细胞系抗性和敏感细胞与Bt Cry1Ac毒素结合的比较 | 第55-63页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·昆虫细胞与Bt杀虫晶体蛋白(ICPs) | 第55页 |
| ·化学试剂与Cry1Ac抗体 | 第55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·Cry1Ac的FITC荧光标记 | 第55-56页 |
| ·敏感和抗性两种细胞与毒素结合的荧光显微观察 | 第56页 |
| ·敏感和抗性两种细胞与毒素结合的ELISA分析 | 第56页 |
| ·敏感和抗性两种细胞毒素结合蛋白的配体结合印迹试验 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-60页 |
| ·敏感和抗性两种细胞与毒素的结合的荧光显微观察 | 第57-58页 |
| ·敏感和抗性两种细胞与毒素结合的ELISA分析 | 第58-59页 |
| ·敏感和抗性两种细胞毒素结合蛋白的配体印迹实验结果 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 4 小结 | 第61页 |
| 5 参考文献 | 第61-63页 |
| 第4章 一些化学物质对Bt Cry1Ac活性毒素与粉纹夜蛾细胞系作用的影响及抗性和敏感细胞耐低渗溶液处理的比较 | 第63-70页 |
| 1 材料与方法 | 第63-64页 |
| ·材料 | 第63页 |
| ·昆虫细胞 | 第63页 |
| ·试剂与溶液 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·TnH5细胞的处理及其对Cry1Ac敏感性变化的测定 | 第63-64页 |
| ·细胞耐低渗能力的测定 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-66页 |
| ·化学物质对Cry1Ac毒力的影响 | 第64-65页 |
| ·敏感和抗性两种细胞耐低渗能力的比较 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 4 小结 | 第67-68页 |
| 5 参考文献 | 第68-70页 |
| 第5章 粉纹夜蛾细胞系抗性与敏感细胞碱性磷酸酶和氨肽酶的比较 | 第70-81页 |
| 1 材料与方法 | 第70-73页 |
| ·材料 | 第70-71页 |
| ·昆虫细胞 | 第70页 |
| ·试剂与溶液 | 第70-71页 |
| ·主要仪器设备 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-73页 |
| ·氨肽酶酶源液的制备和相对活力测定 | 第71页 |
| ·碱性磷酸酶酶源液的制备和相对活力的测定 | 第71页 |
| ·敏感和抗性两种细胞总RNA的制备 | 第71页 |
| ·敏感和抗性两种细胞cDNA的制备 | 第71页 |
| ·敏感和抗性两种细胞氨肽酶N cDNA片断的PCR扩增 | 第71-72页 |
| ·氨肽酶N cDNA片断的克隆与序列分析 | 第72-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-78页 |
| ·敏感和抗性两种细胞氨肽酶和碱性磷酸酶相对活力的测定结果 | 第73页 |
| ·敏感和抗性两种细胞氨肽酶N cDNA片断的克隆与序列分析 | 第73-78页 |
| 3 讨论 | 第78-79页 |
| 4 小结 | 第79-80页 |
| 5 参考文献 | 第80-81页 |
| 第6章 粉纹夜蛾细胞系抗性与敏感细胞mRNA的差异显示 | 第81-91页 |
| 1 材料与方法 | 第81-83页 |
| ·材料 | 第81-82页 |
| ·昆虫细胞 | 第81页 |
| ·试剂与溶液 | 第81-82页 |
| ·主要仪器设备 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-83页 |
| ·RNA样品的制备 | 第82页 |
| ·逆转录PCR | 第82页 |
| ·序列胶展示与差异条带回收 | 第82-83页 |
| ·逆向Northern杂交 | 第83页 |
| ·差异片段的克隆 | 第83页 |
| ·DNA测序与同源性分析 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-88页 |
| ·序列胶展示，差异条带回收及逆向Northern杂交 | 第83-85页 |
| ·差异ESTs片段的测序与同源性分析 | 第85-88页 |
| 3 讨论 | 第88-89页 |
| 4 小结 | 第89页 |
| 5 参考文献 | 第89-91页 |
| 第7章 粉纹夜蛾细胞系抗性与敏感细胞差异蛋白质组分析 | 第91-109页 |
| 1 材料与方法 | 第91-95页 |
| ·材料 | 第91-92页 |
| ·昆虫细胞 | 第91页 |
| ·试剂与溶液 | 第91-92页 |
| ·主要实验仪器 | 第92页 |
| ·方法 | 第92-95页 |
| ·细胞总蛋白与膜蛋白的制备 | 第92-93页 |
| ·第一向等电聚焦电泳 | 第93页 |
| ·第二向SDS-PAGE电泳 | 第93-94页 |
| ·双向胶的银染与分析 | 第94-95页 |
| ·总蛋白中差异蛋白的肽质指纹图谱分析 | 第95页 |
| 2.结果与分析 | 第95-105页 |
| ·敏感和抗性两种细胞的总蛋白差异显示 | 第95-99页 |
| ·差异总蛋白的肽质指纹图谱及检索结果 | 第99-102页 |
| ·敏感和抗性两种细胞的总膜蛋白差异显示 | 第102-105页 |
| 3 讨论 | 第105-106页 |
| 4 小结 | 第106页 |
| 5 参考文献 | 第106-109页 |
| 第8章 总结与讨论 | 第109-114页 |
| 本论文的创新点 | 第114-115页 |
| 博士在读期间已经发表的相关论文 | 第115-116页 |
| 附录 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
