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大型药用真菌蛋白AAL基因的鉴定及诱导细胞凋亡机制的研究

摘要第1-11页
第一章 前言第11-46页
 一、药用真菌中具有抗肿瘤活性的凝集素第11-21页
   ·凝集素( Lectin)第11-21页
     ·真菌凝集素的理化性质第12-15页
     ·真菌凝集素的N端序列及cDNA序列第15-17页
     ·真菌凝集素的抗肿瘤活性第17-19页
     ·植物和细菌凝集素的抗肿瘤活性第19-21页
 二、半乳糖结合凝集素(Galectin)第21-35页
   ·Galectin的非传统分泌方式第22-23页
   ·Galectin的多价性第23-25页
   ·其他 Galectin相关蛋白第25-27页
     ·Galectin-10亚族第25页
     ·GRIFIN第25-27页
   ·Galectin在细胞生长和凋亡方面的功能第27-35页
     ·Galectin-1第28-30页
     ·Galectin-3第30-32页
     ·Galectin-7第32-33页
     ·Galectin-9第33页
     ·Galectin-12第33-35页
 三、Ras蛋白、法尼基转移酶和法尼基转移酶抑制剂第35-45页
   ·Ras蛋白第35-40页
     ·Ras的翻译后修饰第35-37页
     ·Ras的上游信号途径第37-38页
     ·Ras的下游信号途径第38-40页
     ·肿瘤中的异常 Ras信号第40页
   ·法尼基转移酶第40-43页
   ·法尼基转移酶抑制剂(Inhibitor of Farnesyltransferase,FTI)第43-45页
 研究背景第45页
 研究目的第45-46页
第二章 杨树菇凝集素AAL cDNA的克隆和表达第46-69页
   ·引言第46-47页
   ·材料和方法第47-61页
     ·菌株,质粒和试剂第47-59页
  实验中所用到的溶液及试剂第59-61页
   ·研究结果第61-66页
     ·AAL的cDNA的扩增和鉴定第61-62页
     ·AAL的cDNA的测序第62-63页
     ·AAL原核表达载体pET28-aal的构建和鉴定第63-66页
   ·讨论第66-69页
第三章 AAL相互作用肽的筛选、法尼基转移酶基因的克隆和相互作用的研究第69-90页
   ·引言第69-70页
   ·材料和方法第70-80页
     ·质粒,文库,抗体和试剂第70页
     ·噬菌体文库筛选第70-73页
     ·细胞学实验技术第73-75页
     ·细胞转染第75-76页
     ·酵母双杂交系统第76-78页
     ·免疫共沉淀第78-79页
     ·Western Blot第79-80页
   ·实验结果第80-87页
     ·15肽库的筛选结果第80页
     ·法尼基转移酶 α亚基的克隆和鉴定第80-82页
     ·质粒pGBK-aal的构建和鉴定第82-83页
     ·pHM6-aal和pCMV-FTase α的构建和鉴定第83-85页
     ·AAL和 FTase α在酵母中的相互作用第85-86页
     ·AAL与 FTase α在 Hela细胞中的相互作用第86-87页
   ·讨论第87-90页
第四章 AAL作为 FTI而诱导细胞凋亡第90-101页
   ·引言第90-93页
   ·材料和方法第93-96页
     ·实时定量 PCR第93-94页
     ·间接免疫荧光试验第94页
     ·流式细胞术分析第94-95页
     ·PI染色及流式细胞仪分析第95页
     ·膜蛋白的提取方法第95-96页
   ·实验结果第96-99页
     ·AAL影响了Ras在膜上的定位第96页
     ·AAL上调了Fas的转录第96-97页
     ·AAL上调了Fas的表达量第97-98页
     ·AAL诱导了HeLa细胞的凋亡第98-99页
   ·讨论第99-101页
参考文献第101-111页
研究总结和创新点第111-112页
硕士研究生期间发表的论文第112-113页
致谢第113-114页

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