| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 猪瘟病毒简介 | 第11-13页 |
| ·猪瘟综述 | 第11页 |
| ·猪瘟病毒综述 | 第11-12页 |
| ·CSFV 诱导的猪免疫反应 | 第12-13页 |
| ·猪瘟疫苗研究现状 | 第13页 |
| 2 家蚕杆状病毒表达系统综述 | 第13-17页 |
| ·家蚕/ BmNPV 表达系统 | 第13-14页 |
| ·Bac-to-Bac 系统 | 第14-16页 |
| ·杆状病毒表面展示系统 | 第16-17页 |
| 3 展望 | 第17-19页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第19-21页 |
| 1 研究目的和意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19-21页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第21-28页 |
| 1 序列和工具 | 第21页 |
| ·序列 | 第21页 |
| ·生物信息学工具 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21页 |
| 3 结果 | 第21-27页 |
| ·E0 基因和 E2 基因的序列分析 | 第21-22页 |
| ·信号肽分析结果 | 第22-23页 |
| ·跨膜区分析结果 | 第23-24页 |
| ·疏水性分析结果 | 第24-26页 |
| ·二级结构预测结果 | 第26页 |
| ·空间结构预测 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 第四章 猪瘟病毒E0基因和E2基因融合POLH基因的原核表达载体的构建 | 第28-40页 |
| 1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| ·菌种 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·主要试剂的配置 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-32页 |
| ·E0 基因和 E2 基因的 PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-polh-E0 和 pET-28a(+)-polh-E2 的构建 | 第30-31页 |
| ·用 CaCl_2法制备 E.coli TG1、Rosseta 感受态细胞 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-38页 |
| ·E0 基因和 E2 基因的 PCR 扩增鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒 pET-28a(+)-polh-E0 和 pET-28a(+)-polh-E2 的鉴定 | 第33-34页 |
| ·序列测定 | 第34-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第五章 原核重组蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备 | 第40-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·主要试剂的配制 | 第40-42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| ·重组质粒在 E.coli 中的诱导表达 | 第42页 |
| ·通过 pH 值调节和离心分离纯化蛋白 Polh-E0 和 Polh-E232 | 第42-43页 |
| ·凝胶过滤层析进一步纯化目的蛋白 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测目的蛋白纯度 | 第43-44页 |
| ·制备多克隆抗体 | 第44-46页 |
| 3 结果 | 第46-47页 |
| ·重组质粒在 E.coli 中的诱导表达及纯化结果 | 第46页 |
| ·抗体效价的测定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第六章 猪瘟病毒E0基因和E2基因表面展示载体的构建 | 第49-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·试剂配制 | 第49-50页 |
| 2 方法 | 第50-53页 |
| ·pFastBac1-SP-E0-TM 和 pFastBac1-SP-E2-TM 重组质粒的构建 | 第50页 |
| ·重组 BmBacmid- E0 和 BmBacmid -E2 的构建 | 第50-52页 |
| ·细胞培养与冻存、复苏 | 第52-53页 |
| ·重组病毒 Bm NPV-E0 和 Bm NPV-E2 的构建 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·pFastBac1-SP-E0-TM 和 pFastBac1-SP-E2-TM 重组质粒的鉴定 | 第53-54页 |
| ·BmBacmid-E0 和 BmBacmid-E2 鉴定 | 第54-55页 |
| ·BmBacmid-E0 和 BmBacmid-E2 转染家蚕细胞 | 第55-56页 |
| ·重组病毒 Bm NPV-E0 和 Bm NPV-E2 的鉴定结果 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 第七章 猪瘟病毒E0蛋白和E2蛋白在家蚕蛹中的表达及免疫原性初探 | 第58-65页 |
| 1 材料与试剂 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·试剂和设备 | 第58页 |
| ·试剂的配制 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-61页 |
| ·重组病毒接种蚕蛹 | 第59页 |
| ·重组病毒基因 PCR 鉴定 | 第59页 |
| ·病毒基因组 PCR 鉴定 | 第59页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·目的蛋白的免疫印记检测 | 第60-61页 |
| ·重组病毒免疫小鼠 | 第61页 |
| ·抗体的效价测定 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-64页 |
| ·蚕蛹中提取 BmNPV-E0 和 BmNPV-E2 的 PCR 鉴定结果 | 第61-62页 |
| ·目的蛋白的 SDS-PAGE 检测和免疫印记检测 | 第62-63页 |
| ·抗体的效价测定 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
