| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 第一部分 引言与文献综述 | 第7-23页 |
| 1 引言 | 第7-9页 |
| 1．1 草菇的生物学特性 | 第7页 |
| 1．2 草菇的生产状况及经济意义 | 第7-9页 |
| 2 食用菌遗传转化研究进展 | 第9-16页 |
| 2．1 遗传转化方法 | 第10-14页 |
| 2．2 启动子与筛选标记 | 第14-16页 |
| 3 抗冷冻蛋白研究进展 | 第16-22页 |
| 3．1 抗冷冻蛋白概述 | 第16页 |
| 3．2 抗冷冻蛋白类型 | 第16-17页 |
| 3．3 抗冷冻蛋白特性 | 第17-18页 |
| 3．4 抗冷冻蛋白基因 | 第18-20页 |
| 3．5 抗冷冻蛋白基因工程研究进展 | 第20-22页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第22页 |
| 5 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二部分 基因枪法遗传转化草菇 | 第23-34页 |
| 1 材料与试剂 | 第23页 |
| 2 草菇材料的准备与抗性梯度预试验 | 第23-24页 |
| 2．1 草菇材料的准备 | 第23页 |
| 2．2 抗性梯度试验 | 第23-24页 |
| 3 基因枪轰击草菇完整菌丝 | 第24-34页 |
| 3．1 植物表达载体pCAMBIA1301的小量提取与纯化 | 第24-25页 |
| 3．2 微弹制备 | 第25-26页 |
| 3．3 转化 | 第26页 |
| 3．4 抗性植株筛选 | 第26-27页 |
| 3．5 GUS组织化学分析 | 第27页 |
| 3．6 假定转化子的出菇试验 | 第27-29页 |
| 3．7 GUS酶活力检测 | 第29-30页 |
| 3．8 Southern斑点杂交 | 第30-34页 |
| 第三部分 农杆菌遗传转化草菇 | 第34-43页 |
| 1 直接转化法将植物表达载体pCAMBIA1301和重组质粒pCTH823分别转入根癌农杆菌 | 第34-40页 |
| 1．1 培养基、菌种与试剂 | 第34页 |
| 1．2 重组质粒pCTH823的构建 | 第34-37页 |
| 1．3 直接转化 | 第37-38页 |
| 1．4 农杆菌双元载体中Mini-Ti质粒DNA的提取 | 第38-39页 |
| 1．5 PCR检测 | 第39-40页 |
| 2 草菇组织培养 | 第40页 |
| 3 遗传转化草菇 | 第40-43页 |
| 3．1 Hyg筛选转化体浓度梯度预实验 | 第40页 |
| 3．2 Cefotaxime对草菇菌丝的毒性实验 | 第40页 |
| 3．3 农杆菌菌液的制备 | 第40-41页 |
| 3．4 农杆菌侵染 | 第41页 |
| 3．5 抗性植株的筛选 | 第41-42页 |
| 3．6 转化植株的PCR检测 | 第42-43页 |
| 第四部分 结果与分析 | 第43-59页 |
| 1 基因枪法遗传转化草菇 | 第43-52页 |
| 1．1 草菇材料的准备与抗性梯度预试验 | 第43-44页 |
| 1．2 基因枪法转化草菇完整菌丝的有关参数的优化 | 第44-45页 |
| 1．3 GUS组织化学分析 | 第45-46页 |
| 1．4 假定转化子的出菇试验 | 第46-47页 |
| 1．5 GUS酶活力检测 | 第47-51页 |
| 1．6 Southern斑点杂交检测 | 第51-52页 |
| 2 农杆菌遗传转化草菇 | 第52-59页 |
| 2．1 直接转化法将植物表达载体pCAMBIA1301、重组质粒pCTH823分别导入根癌农杆菌 | 第52-55页 |
| 2．2 Cefotaxime对草菇菌丝的毒性实验 | 第55-56页 |
| 2．3 Hyg筛选转化体浓度梯度预实验 | 第56-57页 |
| 2．4 农杆菌对草菇品种的转化 | 第57页 |
| 2．5 PCR检测 | 第57-59页 |
| 第五部分 结论 | 第59-60页 |
| 第六部分 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 英文摘要 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
