| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| ·胆固醇氧化酶的来源和分类 | 第9页 |
| ·胆固醇氧化酶分子研究进展 | 第9-13页 |
| ·胆固醇氧化酶的酶学性质 | 第9-10页 |
| ·胆固醇氧化酶的结构和反应机理 | 第10-12页 |
| ·胆固醇氧化酶酶活的测定 | 第12页 |
| ·胆固醇氧化酶的基因克隆和表达研究 | 第12-13页 |
| ·胆固醇氧化酶应用前景 | 第13-14页 |
| ·临床诊断 | 第13-14页 |
| ·食品加工 | 第14页 |
| ·制药工业 | 第14页 |
| ·工具酶 | 第14页 |
| ·新型杀虫剂 | 第14页 |
| ·立题背景及本文的主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 信号肽对BREVIBACTERIUM SP. DGCDC-82 胆固醇氧化酶基因在E.C OLI 中表达的影响 | 第16-27页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·工具酶和试剂 | 第16页 |
| ·培养基及常用试剂的配制 | 第16-17页 |
| ·引物 | 第17-18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-22页 |
| ·胆固醇氧化酶基因组DNA 的提取 | 第18-19页 |
| ·胆固醇氧化酶基因的扩增 | 第19页 |
| ·DNA 电泳回收（参照回收试剂盒） | 第19页 |
| ·质粒的提取 | 第19-20页 |
| ·DNA 的限制性酶切 | 第20页 |
| ·质粒载体片段与外源片段的连接 | 第20页 |
| ·CaCl_2 法制备感受态细胞与转化 | 第20-21页 |
| ·重组转化子的筛选 | 第21页 |
| ·重组质粒在E.coli 中的诱导表达及目的产物的检测 | 第21-22页 |
| ·酶活鉴定 | 第22页 |
| ·过氧化氢标准曲线的绘制 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-25页 |
| ·胆固醇氧化酶基因的扩增与重组质粒的构建 | 第22-24页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第24页 |
| ·表达产物的活性分析 | 第24-25页 |
| ·外源蛋白的表达形式 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| ·信号肽对Brevibacterium sp. DGCDC-82 胆固醇氧化酶基因表达的影响 | 第25页 |
| ·影响表达的因素分析 | 第25-27页 |
| 第三章 BREVIBACTERIUM SP. DGCDC-82胆固醇氧化酶基因在E.COLI中的表达 | 第27-33页 |
| ·材料与方法 | 第27-28页 |
| ·菌株、质粒、引物和试剂 | 第27页 |
| ·DNA 重组、转化及阳性转化子筛选 | 第27页 |
| ·重组菌诱导表达条件的优化 | 第27-28页 |
| ·表达产物的酶学性质 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-32页 |
| ·重组E.coli 的构建 | 第28-29页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第29页 |
| ·胆固醇氧化酶诱导表达条件的优化 | 第29-31页 |
| ·表达产物酶学性质测定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 BREVIBACTERIUM SP. DGCDC-82 胆固醇氧化酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第33-41页 |
| ·材料 | 第33-35页 |
| ·菌株及质粒 | 第33-34页 |
| ·工具酶及试剂 | 第34页 |
| ·主要培养基 | 第34-35页 |
| ·引物 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·表达载体的构建 | 第35页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·重组质粒pPIC9K-COD 和空质粒pPIC9K 的线性化 | 第35-36页 |
| ·线性化质粒分别转化毕赤酵母 | 第36页 |
| ·His~+Mut~+阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| ·G418 筛选高拷贝转化子 | 第36页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第36-37页 |
| ·阳性重组子的PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌株的诱导表达 | 第37页 |
| ·重组胆固醇氧化酶活性鉴定和SDS-PAGE 分析 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-39页 |
| ·毕赤酵母重组表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第38-39页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌株的诱导表达及产物检测 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 论文结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
