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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及鉴定

中文摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
英文缩略语第11-12页
第一部分 文献综述第12-23页
 第一章 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)及其抗氧化作用研究进展第12-23页
  1 TPx 基因家族第12-16页
   ·酿酒酵母的TPx第12-13页
   ·寄生虫的TPx第13-14页
   ·哺乳动物TPx第14页
   ·昆虫TPx第14-15页
   ·植物TPx第15-16页
  2 TPx 的抗氧化作用机制第16页
  3 TPx 的生物学特性第16-18页
   ·TPx 对过氧化氢和羟自由基的清除作用第16-17页
   ·TPx 对维持机体氧化还原平衡的作用第17-18页
   ·TPx 的其它特性第18页
  4 展望第18-19页
  参考文献第19-23页
第二部分 实验内容第23-61页
 第二章 细粒棘球绦虫EgTPx 基因的克隆、原核表达、纯化及免疫学特性鉴定第23-41页
  1 材料第23-24页
   ·细粒棘球绦虫原头蚴的收集第23-24页
   ·质粒与菌种第24页
   ·常用分子克隆试剂第24页
   ·实验动物第24页
  2 方法第24-33页
   ·引物的设计与合成第24页
   ·细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)总RNA 的提取第24-25页
   ·RT-PCR 扩增第25-26页
   ·pET-41b- EgTPx 重组质粒的构建及酶切鉴定第26-30页
   ·pET-41b-EgTPx 在大肠杆菌中的诱导表达和纯化第30-31页
   ·鼠抗rEgTPx 抗血清的制备第31-32页
   ·抗体的纯化第32页
   ·原头蚴天然总蛋白的提取第32页
   ·ELISA 法测定抗体水平变化及效价第32-33页
   ·Western blot 免疫印迹检测第33页
  3 结果第33-37页
   ·EgTPx 基因的克隆第33页
   ·原核表达载体的构建及鉴定第33-34页
   ·目的蛋白的诱导表达及纯化第34-36页
   ·EL1SA 法测定该抗体效价第36-37页
   ·重组蛋白的免疫活性鉴定第37页
  4 讨论第37-39页
  参考文献第39-41页
 第三章 细粒棘球绦虫EgTPx 基因在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定第41-61页
  1 材料第41-42页
   ·细粒棘球绦虫原头蚴的收集第41-42页
   ·质粒与菌种第42页
   ·工具酶和生化试剂第42页
  2 方法第42-52页
   ·引物的设计与合成第42页
   ·细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)总RNA 的提取第42页
   ·RT-PCR 扩增第42-44页
   ·pPIC9K- EgTPx 重组质粒的构建及酶切鉴定第44-46页
   ·酵母的电击转化第46-48页
   ·G418 筛选高拷贝转化子第48-49页
   ·PCR 法鉴定转化子第49-50页
   ·Mut~+表型重组酵母的诱导表达第50-51页
   ·表达产物的SDS-PAGE 检测和Western blot 鉴定第51-52页
   ·表达产物的抗氧化功能检测第52页
  3 结果第52-57页
   ·EgTPx 基因的克隆第52页
   ·pPIC9K-EgTPx 的酶切鉴定第52-53页
   ·pPIC9k-EgTPx 质粒的浓度与纯度第53页
   ·重组质粒的线性化回收第53-54页
   ·高拷贝转化子的筛选及Mut~+表型的鉴定第54-55页
   ·表达产物SDS-PAGE 及Western blot 鉴定结果第55-56页
   ·抗氧化功能检测第56-57页
  4 讨论第57-59页
  参考文献第59-61页
结论第61-62页
个人简历第62-63页
致谢第63-66页
附录一第66-71页
附录二第71页

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