中文摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-11页 |
英文缩略语 | 第11-12页 |
第一部分 文献综述 | 第12-23页 |
第一章 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)及其抗氧化作用研究进展 | 第12-23页 |
1 TPx 基因家族 | 第12-16页 |
·酿酒酵母的TPx | 第12-13页 |
·寄生虫的TPx | 第13-14页 |
·哺乳动物TPx | 第14页 |
·昆虫TPx | 第14-15页 |
·植物TPx | 第15-16页 |
2 TPx 的抗氧化作用机制 | 第16页 |
3 TPx 的生物学特性 | 第16-18页 |
·TPx 对过氧化氢和羟自由基的清除作用 | 第16-17页 |
·TPx 对维持机体氧化还原平衡的作用 | 第17-18页 |
·TPx 的其它特性 | 第18页 |
4 展望 | 第18-19页 |
参考文献 | 第19-23页 |
第二部分 实验内容 | 第23-61页 |
第二章 细粒棘球绦虫EgTPx 基因的克隆、原核表达、纯化及免疫学特性鉴定 | 第23-41页 |
1 材料 | 第23-24页 |
·细粒棘球绦虫原头蚴的收集 | 第23-24页 |
·质粒与菌种 | 第24页 |
·常用分子克隆试剂 | 第24页 |
·实验动物 | 第24页 |
2 方法 | 第24-33页 |
·引物的设计与合成 | 第24页 |
·细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)总RNA 的提取 | 第24-25页 |
·RT-PCR 扩增 | 第25-26页 |
·pET-41b- EgTPx 重组质粒的构建及酶切鉴定 | 第26-30页 |
·pET-41b-EgTPx 在大肠杆菌中的诱导表达和纯化 | 第30-31页 |
·鼠抗rEgTPx 抗血清的制备 | 第31-32页 |
·抗体的纯化 | 第32页 |
·原头蚴天然总蛋白的提取 | 第32页 |
·ELISA 法测定抗体水平变化及效价 | 第32-33页 |
·Western blot 免疫印迹检测 | 第33页 |
3 结果 | 第33-37页 |
·EgTPx 基因的克隆 | 第33页 |
·原核表达载体的构建及鉴定 | 第33-34页 |
·目的蛋白的诱导表达及纯化 | 第34-36页 |
·EL1SA 法测定该抗体效价 | 第36-37页 |
·重组蛋白的免疫活性鉴定 | 第37页 |
4 讨论 | 第37-39页 |
参考文献 | 第39-41页 |
第三章 细粒棘球绦虫EgTPx 基因在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定 | 第41-61页 |
1 材料 | 第41-42页 |
·细粒棘球绦虫原头蚴的收集 | 第41-42页 |
·质粒与菌种 | 第42页 |
·工具酶和生化试剂 | 第42页 |
2 方法 | 第42-52页 |
·引物的设计与合成 | 第42页 |
·细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)总RNA 的提取 | 第42页 |
·RT-PCR 扩增 | 第42-44页 |
·pPIC9K- EgTPx 重组质粒的构建及酶切鉴定 | 第44-46页 |
·酵母的电击转化 | 第46-48页 |
·G418 筛选高拷贝转化子 | 第48-49页 |
·PCR 法鉴定转化子 | 第49-50页 |
·Mut~+表型重组酵母的诱导表达 | 第50-51页 |
·表达产物的SDS-PAGE 检测和Western blot 鉴定 | 第51-52页 |
·表达产物的抗氧化功能检测 | 第52页 |
3 结果 | 第52-57页 |
·EgTPx 基因的克隆 | 第52页 |
·pPIC9K-EgTPx 的酶切鉴定 | 第52-53页 |
·pPIC9k-EgTPx 质粒的浓度与纯度 | 第53页 |
·重组质粒的线性化回收 | 第53-54页 |
·高拷贝转化子的筛选及Mut~+表型的鉴定 | 第54-55页 |
·表达产物SDS-PAGE 及Western blot 鉴定结果 | 第55-56页 |
·抗氧化功能检测 | 第56-57页 |
4 讨论 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-61页 |
结论 | 第61-62页 |
个人简历 | 第62-63页 |
致谢 | 第63-66页 |
附录一 | 第66-71页 |
附录二 | 第71页 |