| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-8页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 一、研究背景和立题依据 | 第8页 |
| 二、本文的研究内容和意义 | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-17页 |
| 一、miRNA及其在人和动物中的研究进展 | 第10-13页 |
| （一） microRNA的发现及其特征 | 第10页 |
| 1. microRNA 的发现 | 第10页 |
| 2. microRNA 的特征 | 第10页 |
| （二） microRNA 的产生和可能的作用机制 | 第10-11页 |
| 1. microRNA 的产生过程 | 第10-11页 |
| 2. microRNA 的作用机制 | 第11页 |
| （三） miRNA同小分子干扰RNA（siRNA）的比较 | 第11-12页 |
| （四） miRNA的生物学功能及其研究进展 | 第12-13页 |
| 1. miRNA在动物发育中的调控作用 | 第12页 |
| 2. miRNA在多种人类肿瘤中的作用 | 第12-13页 |
| （五） microRNA 靶基因的预测和鉴定 | 第13页 |
| 1. miRNA靶基因的预测 | 第13页 |
| 2. miRNA靶基因的鉴定 | 第13页 |
| 二、miR-17 家族 | 第13-14页 |
| 三、受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O | 第14-17页 |
| （一） 受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O （PTPRO） | 第14页 |
| （二） PTPRO与肾小球功能的关系 | 第14-15页 |
| （三） 在神经组织发育中的作用 | 第15页 |
| （四） PTPRO抑制增殖和维持分化的性能 | 第15页 |
| （五） PTPRO在肿瘤中的潜在作用 | 第15-17页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第17-27页 |
| 一、实验材料 | 第17-18页 |
| （一） 质粒 | 第17页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第17页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第17页 |
| （四） 试剂 | 第17-18页 |
| 二、实验方法 | 第18-27页 |
| （一） 分子生物学实验方法 | 第18-23页 |
| 1. 分子克隆 | 第18页 |
| 2. DNA的琼脂糖电泳 | 第18页 |
| 3. 质粒大量制备的方法 | 第18-19页 |
| 4. 哺乳动物细胞总RNA的提取 | 第19-21页 |
| 5. 逆转录（Reverse Transcription, RT） | 第21页 |
| 6. PCR和荧光实时定量PCR （Real-time PCR） | 第21-23页 |
| （二） 细胞生物学实验方法 | 第23-24页 |
| 1. 哺乳动物细胞系的培养 | 第23页 |
| 2. 真核生物细胞的瞬时转染 | 第23-24页 |
| 3. 荧光素酶报告基因检测 | 第24页 |
| （三） 蛋白的生物化学实验方法 | 第24-26页 |
| 1. 细胞总蛋白质的提取 | 第24-25页 |
| 2. SDS-PAGE电泳和蛋白质的Western Blotting分析 | 第25-26页 |
| （四） 生物信息学方法预测miRNA靶基因 | 第26-27页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第27-35页 |
| 一、生物信息学方法预测miRNA靶基因 | 第27页 |
| 二、PTPRO-3’UTR报告基因质粒的构建和验证 | 第27-29页 |
| （一） 提取人类基因组DNA | 第27-28页 |
| （二） PTPRO-3’UTR报告基因质粒的构建 | 第28-29页 |
| （三） PTPRO-3’UTR报告基因质粒的验证 | 第29页 |
| 三、PTPRO-3’UTR点突变报告基因质粒的构建和验证 | 第29-31页 |
| 四、转染及双报告检测 | 第31-33页 |
| （一） PTPRO-3’UTR受到内源的pCMVpuro-mir-17-92 的调控 | 第31-32页 |
| （二） 外源转染pCMVpuro-mir-17-92，抑制PGL3-392’UTR报告基因的活性 | 第32-33页 |
| 五、外源转染pCMVpuro-mir-17-92 对PTPRO基因转录的影响 | 第33-34页 |
| 六、外源转染pCMVpuro-mir-17-92 对PTPRO蛋白水平的影响 | 第34-35页 |
| 第四部分 讨论 | 第35-38页 |
| 一、E2F1 和mir-17-92 分别在转录水平和转录后水平调控PTPRO基因的表达 | 第35-36页 |
| 二、mir-17-92 簇中的miR-17-5p，miR-20 在调控PTPRO的过程中起作用 | 第36-38页 |
| 第五部分 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第45页 |
