| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写词 | 第6-10页 |
| 引言 | 第10-17页 |
| 一、肿瘤发生的原因 | 第10-11页 |
| （一） 肿瘤发生的外部因素 | 第10页 |
| （二） 肿瘤发生的内部因素 | 第10-11页 |
| （三） 癌基因 | 第11页 |
| 二、Cripto-1 基因及其蛋白功能研究进展 | 第11-16页 |
| （一） Cripto-1 基因结构 | 第11-12页 |
| （二） 由Cripto-1 调节的细胞内信号传导途径 | 第12-13页 |
| （三） Cripto-1 的生物学功能 | 第13-14页 |
| （四） Cripto-1 与人类各种肿瘤及癌前病变的相关性 | 第14-16页 |
| 三、本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-25页 |
| 一、实验材料 | 第17页 |
| 二、实验所需溶液的配制 | 第17-19页 |
| 三、实验仪器 | 第19-20页 |
| 四、实验方法 | 第20-25页 |
| （一） pxg-Cripto-1 原核表达载体的构建 | 第20页 |
| （二） 冻融法回收PCR目的产物 | 第20页 |
| （三） DNA片段的连接 | 第20页 |
| （四） 感受态菌的制备 | 第20-21页 |
| （五） 连接产物的转化 | 第21页 |
| （六） 重组质粒的提取 | 第21页 |
| （七） Cripto-1 的原核表达 | 第21-22页 |
| （八） Cripto-1 蛋白的分离纯化 | 第22-23页 |
| （九） 重组蛋白浓度测定 | 第23页 |
| （十） 多克隆抗体的制备 | 第23页 |
| （十一） 血清效价检测 | 第23页 |
| （十二） IgG抗体的提取纯化 | 第23页 |
| （十三） 免疫印迹（ Western Blot） | 第23-25页 |
| 结果与分析 | 第25-35页 |
| 一、pxg-Cripto-1 原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| （一） Cripto-1EGF-CFC功能区cDNA序列的PCR扩增 | 第25页 |
| （二） 重组质粒的电泳鉴定 | 第25-26页 |
| （三） 重组载体pxg-Cripto-1 的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| 二、Cripto-1 蛋白的原核表达 | 第27-29页 |
| （一） Cripto-1 蛋白的原核表达 | 第27-28页 |
| （二） Cripto-1 蛋白原核表达性质的确定 | 第28-29页 |
| 三、Cripto-1 蛋白的大量表达及包涵体的分离与纯化 | 第29-31页 |
| （一） 大量原核表达Cripto-1 蛋白及包涵体的提取 | 第29页 |
| （二） Cripto-1 原核蛋白的凝胶柱层析纯化 | 第29-30页 |
| （三） 纯化蛋白浓度测定 | 第30-31页 |
| 四、Cripto-1 多克隆抗体的制备及抗体效价的测定 | 第31-33页 |
| （一） 免疫动物血清效价的检测 | 第31-32页 |
| （二） 抗体IgG的提取纯化 | 第32-33页 |
| （三） 抗体IgG效价的测定 | 第33页 |
| 五、抗血清与Cripto-1 的结合特异性分析 | 第33-34页 |
| 六、Cripto-1 在各种传代细胞系中的表达 | 第34-35页 |
| 讨论 | 第35-38页 |
| 一、Cripto-1 蛋白原核表达条件的优化研究 | 第35页 |
| 二、Cripto-1 在肿瘤细胞系及正常细胞系中表达情况分析 | 第35-36页 |
| 三、Cripto-1 促肿瘤发生可能机制的探讨及抗体在未来的研究中可能发挥的作用 | 第36-38页 |
| 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 致谢 | 第42页 |
