| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 微生物乙醇代谢工程研究进展 | 第12-27页 |
| ·前言 | 第12-14页 |
| ·化石能源枯竭 | 第12-13页 |
| ·生物能源时代的来临 | 第13-14页 |
| ·利用纤维素等进行第二代乙醇生产 | 第14-15页 |
| ·S.CEREVISIAE 代谢工程改造 | 第15-16页 |
| ·Z.MOBILIS 乙醇代谢工程改造 | 第16-17页 |
| ·产酸克雷伯氏菌、软腐欧文氏菌等其它乙醇工程菌 | 第17-18页 |
| ·E.COLI 乙醇代谢菌株的改造 | 第18-25页 |
| ·E.coli 和Z. mobilis 的乙醇发酵途径对比 | 第18-19页 |
| ·Z.mobilis 双酶体系 | 第19-22页 |
| ·E.coli 乙醇代谢工程 | 第22-24页 |
| ·选育和改造耐抑制剂的产乙醇重组大肠杆菌 | 第24-25页 |
| ·立题依据 | 第25-27页 |
| 第二章 耐乙醇菌株的筛选和PDC-ADHB 双酶质粒的构建 | 第27-41页 |
| ·材料和方法 | 第27-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·细菌培养基 | 第28-29页 |
| ·抗生素 | 第29页 |
| ·生物化学试剂 | 第29页 |
| ·酶 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·菌体培养 | 第29页 |
| ·基因序列验证 | 第29-30页 |
| ·基因组DNA 的分离 | 第30页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒DNA | 第30-31页 |
| ·酶切及连接反应 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收 | 第31页 |
| ·克隆pdc、adhB 等基因所用的引物 | 第31-32页 |
| ·PCR 扩增 | 第32页 |
| ·菌落PCR | 第32-33页 |
| ·DNA 片段的电击转化及筛选 | 第33页 |
| ·乙醇大肠杆菌的定向筛选 | 第33页 |
| ·乙醇含量的气相色谱测定 | 第33页 |
| ·乙醇含量标准曲线绘制 | 第33-34页 |
| ·乙醇耐受菌株的筛选 | 第34页 |
| ·乙醇耐受菌株活力测定 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-39页 |
| ·不同来源的大肠杆菌的乙醇耐受性比较 | 第34-35页 |
| ·E.coliMG1655 对不同浓度乙醇耐受能力 | 第35页 |
| ·E.coliMG1655 乙醇耐受菌株的筛选 | 第35-36页 |
| ·pdc、adhB 基因序列分析 | 第36-37页 |
| ·PDC-ADHB 双酶体系质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·转入pdc-adhB 双酶基因后，重组菌的乙醇生产能力 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| ·乙醇耐受菌株的筛选 | 第39-40页 |
| ·PDC-ADHB 产乙醇途径的建立 | 第40-41页 |
| 第三章 PFLB、LDHA 基因缺失突变株的构建和功能验证 | 第41-54页 |
| ·材料与方法 | 第41-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·基因缺失及验证引物 | 第42页 |
| ·培养基以及培养条件 | 第42页 |
| ·带有pKD46 辅助质粒MG1655 感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·pK46 质粒的消除 | 第43页 |
| ·ΔpflB 突变株的验证 | 第43页 |
| ·抗性标记基因的剔除 | 第43页 |
| ·带有pet 质粒的工程菌株的发酵 | 第43-44页 |
| ·乙酸、乳酸等副产物含量、葡萄糖残余量的检测 | 第44页 |
| ·RED 突变系统原理 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-52页 |
| ·大肠杆菌厌氧代谢途径分析及重新构建 | 第45-46页 |
| ·pflB 基因缺失载体的构建 | 第46-47页 |
| ·MP-P4、MG1655E、MP 发酵葡萄糖产乙醇及副产物比较分析 | 第47-49页 |
| ·ldhA 基因的缺失 | 第49-50页 |
| ·ΔldhA、ΔpflB 突变株的功能验证 | 第50-51页 |
| ·P4 质粒对菌株厌氧生长能力的回补 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 PFLB、LDHA 双缺失乙醇工程菌发酵分析 | 第54-58页 |
| ·材料与方法 | 第54页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·发酵培养 | 第54页 |
| ·副产物及糖消耗率检测方法 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-57页 |
| ·MG1655E、MP、MP-P4、MPL-P4 发酵葡萄糖时，生长速度及pH 值分析 | 第54-55页 |
| ·MPL-P4 副产物产量及分析 | 第55-56页 |
| ·MPL-P4 乙醇产量及分析 | 第56页 |
| ·MG1655、MP、MP-P4、MPL-P4 发酵葡萄糖利用率 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 小结 | 第58-59页 |
| 附录1 Z.MOBILIS10232 ADHB 的核苷酸序列及开放读码框 | 第59-61页 |
| 附录2 Z.MOBILIS10232 PDC 的核苷酸序列及开放读码框 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简介 | 第72页 |
