| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| ·多基因融合转化方法在转基因植物中的应用 | 第14-21页 |
| ·获得多价转基因植物的方法 | 第14-17页 |
| ·利用多基因融合方法获得转基因植物 | 第17-20页 |
| ·2A 作为连接肽构建融合基因 | 第20页 |
| ·LP4 作为连接肽构建融合基因 | 第20-21页 |
| ·LP4/2A 作为连接肽构建融合基因 | 第21页 |
| ·报告基因在转基因植物中的研究 | 第21-22页 |
| ·绿色荧光蛋白基因 | 第21-22页 |
| ·β-葡萄糖醛酸糖苷酶基因 | 第22页 |
| ·瞬时表达体系在转基因植物中的应用 | 第22页 |
| ·本研究的立题依据 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的 | 第23-24页 |
| 第二章 利用玉米瞬时表达体系分析2A 和 LP4/2A 的剪切作用 | 第24-54页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·培养基与抗生素 | 第24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·酶与生化试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·实验所需溶液的配制 | 第25-27页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| ·幼胚的剥离 | 第25页 |
| ·玉米愈伤组织的诱导及植株分化再生培养基 | 第25-26页 |
| ·基因枪转化 | 第26页 |
| ·GUS 分析 | 第26页 |
| ·蛋白质电泳试剂与缓冲液 | 第26-27页 |
| ·Western Blotting 试剂 | 第27页 |
| ·其它实验试剂的配制 | 第27页 |
| ·实验所用引物 | 第27-29页 |
| ·研究方法 | 第29-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·重组质粒的转化 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶回收DNA 片段 | 第30页 |
| ·在质粒载体中进行DNA 克隆 | 第30-31页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒DNA | 第31页 |
| ·用QIAGEN-tip100 试剂盒大量提取质粒 | 第31页 |
| ·玉米的控制授粉 | 第31-32页 |
| ·幼胚的剥离和培养 | 第32页 |
| ·基因枪微弹的准备 | 第32页 |
| ·用基因枪进行玉米转化 | 第32-33页 |
| ·GUS 分析 | 第33-34页 |
| ·GFP 的荧光分析 | 第34页 |
| ·植物组织总RNA 的提取 | 第34页 |
| ·第一链cDNA 的合成(按Invitrogen 公司反转录试剂盒说明书进行) | 第34-35页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第35页 |
| ·Western blot 检测 | 第35-37页 |
| ·构建的载体 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-53页 |
| ·载体p35PASAT 的构建 | 第38-40页 |
| ·载体p355APAT 的构建 | 第40-42页 |
| ·载体p35PLASLAT 的构建 | 第42-44页 |
| ·载体p355LAPLAT 的构建 | 第44-46页 |
| ·载体pPT 的构建 | 第46-47页 |
| ·载体pST 的构建 | 第47-48页 |
| ·基因枪轰击玉米愈伤组织的GUS 组织化学分析 | 第48-49页 |
| ·基因枪轰击玉米愈伤组织的GUS 荧光定量分析 | 第49-50页 |
| ·基因枪轰击玉米愈伤组织的GFP 分析 | 第50页 |
| ·基因枪轰击玉米愈伤组织的RT-PCR 分析 | 第50-52页 |
| ·基因枪轰击玉米愈伤组织的Western blot 分析 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| ·完成了六个表达载体的构建 | 第53页 |
| ·在转基因玉米愈伤中检测融合基因表达 | 第53页 |
| ·研究2A、LP4/2A 的剪切作用 | 第53-54页 |
| 第三章 利用转基因玉米稳定表达体系分析2A和LP4/2A的剪切作用 | 第54-61页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·实验所需溶液配制 | 第54页 |
| ·植物基因组的提取（CTAB 法） | 第54页 |
| ·研究方法 | 第54-56页 |
| ·玉米愈伤组织的转化与植株的再生 | 第54页 |
| ·植物基因组DNA 的提取 | 第54-55页 |
| ·植物基因组DNA 的试剂盒小量提取 | 第55页 |
| ·基因组DNA 的PCR 扩增 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-60页 |
| ·玉米愈伤组织的转化与植株再生 | 第56页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第56-58页 |
| ·转基因植株的RT-PCR 检测 | 第58页 |
| ·转基因植株的Western blot 检测 | 第58-59页 |
| ·转基因植株的GFP 检测 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| ·再生植株的获得 | 第60页 |
| ·再生植株的分子检测 | 第60页 |
| ·在转基因玉米植株中检测融合基因表达 | 第60-61页 |
| 第四章 结论 | 第61-62页 |
| 第五章 讨论 | 第62-64页 |
| ·利用2A 和LP4/2A 融合多基因进行遗传转化 | 第62页 |
| ·重叠PCR 在融合基因表达载体构建中的应用 | 第62-63页 |
| ·利用瞬时表达体系和稳定表达体系进行分析 | 第63页 |
| ·关于连接肽的剪切分析 | 第63页 |
| ·关于基因位置造成的表达量差异的分析 | 第63-64页 |
| 创新点 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简历 | 第71页 |
