| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| ·硝基酚类化合物的种类、性质以及危害 | 第12页 |
| ·有机磷农药的微生物降解 | 第12-14页 |
| ·硝基酚的代谢途径 | 第14-20页 |
| ·2-硝基酚的代谢途径 | 第14-15页 |
| ·3-硝基酚的代谢途径 | 第15-16页 |
| ·二硝基酚(Dinitrophenol，DNP)的代谢 | 第16-17页 |
| ·2，4，6-三硝基酚(2,4,6-Trinitrophenol，TNP)的代谢途径 | 第17-18页 |
| ·4-硝基酚的代谢途径 | 第18-20页 |
| ·研究意义和目的 | 第20-22页 |
| 第二章 活性淤泥宏基因组中偏苯三酚1，2-双加氧酶部分基因片段的克隆和4-硝基酚降解菌株的筛选鉴定 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·土壤样品，菌株和质粒 | 第22页 |
| ·仪器、试剂和工具酶 | 第22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·溶液 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·土壤宏基因组 DNA 的提取 | 第23页 |
| ·土壤宏基因组中偏苯三酚1,2-双加氧酶基因同源克隆简并引物的设计 | 第23-24页 |
| ·土壤宏基因组中偏苯三酚1,2 - 双加氧酶基因部分序列的克隆 | 第24-26页 |
| ·土壤宏基因组中偏苯三酚1,2-双加氧酶部分片段的系统进化树分析 | 第26页 |
| ·菌株的分离和筛选 | 第26页 |
| ·4-硝基酚降解菌基因组 DNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·4-硝基酚降解菌的1651DNA 序列分析 | 第27-28页 |
| ·实验结果 | 第28-31页 |
| ·活性淤泥宏基因组中偏苯三酚1，2-双加氧酶基因部分序列片段的克隆与分析 | 第28-29页 |
| ·活性淤泥宏基因组中偏苯三酚1，2 -双加氧酶基因部分序列片段的系统发生树分析 | 第29页 |
| ·4-硝基酚降解菌的筛选 | 第29-31页 |
| ·4-硝基酚降解菌1-7 的16SrDNA 分析 | 第31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 4-硝基酚降解基因簇中偏苯三酚12，-双加氧酶和马来酰乙酸还原酶基因的克隆 | 第33-47页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·仪器、试剂和工具酶 | 第33页 |
| ·引物 | 第33页 |
| ·溶液 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因部分序列的克隆 | 第34页 |
| ·已知序列两端侧翼序列的扩增 | 第34-36页 |
| ·所获得完整序列的分析 | 第36页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因全长的扩增 | 第36-37页 |
| ·马来酰乙酸还原酶基因的获得 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-45页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因部分序列的获得 | 第38-39页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因片段侧翼序列的获得 | 第39页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因全长的克隆 | 第39-41页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因di01 的序列分析 | 第41-42页 |
| ·马来酰乙酸还原酶基因全长的克隆 | 第42-44页 |
| ·马来酰乙酸还原酶基因的序列分析 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 偏苯三酚1,2-双加氧酶基因D101和马来酰乙酸还原酶基因MAL的原核表达及功能验证 | 第47-60页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·仪器、工具酶和试剂 | 第47页 |
| ·溶液 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·质粒pET-30a、pEASY-di01 和pEASY-mal 的大量提取 | 第48-49页 |
| ·重组表达载体pET–di01 和pET–mal 的构建 | 第49页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因di01 在大肠杆菌中的表达以及蛋白检测 | 第49页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶Di01 的分离纯化 | 第49-50页 |
| ·偏苯三酚1，2-双加氧酶Di01 的酶活检测 | 第50页 |
| ·马来酰乙酸还原酶基因mal 在大肠杆菌中的诱导表达以及检测 | 第50-51页 |
| ·马来酰乙酸还原酶 Mal 的纯化 | 第51页 |
| ·马来酰乙酸还原酶 Mal 的酶活测定 | 第51页 |
| ·马来酰乙酸还原酶 Mal 的蛋白定量以及比活性测定 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-57页 |
| ·重组表达载体pET–di01 的构建 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的pET–di01 酶切鉴定 | 第53页 |
| ·偏苯三酚1,2-双加氧酶基因di01 在大肠杆菌中的表达以及该酶的分离纯化 | 第53-54页 |
| ·偏苯三酚1，2-双加氧酶Dio 的酶活测定 | 第54页 |
| ·重组表达载体pET–mal 的构建 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pET–mal 的酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·马来酰乙酸还原酶基因mal 在大肠杆菌中的表达 | 第56页 |
| ·马来酰乙酸还原酶的分离纯化 | 第56-57页 |
| ·马来酰乙酸还原酶 Mal 的酶活测定 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 全文结论 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
