| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 中文文摘 | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-34页 |
| ·课题背景 | 第12-14页 |
| ·微生物脂肪酶 | 第14-15页 |
| ·嗜热微生物 | 第15-27页 |
| ·嗜热微生物的嗜热机制 | 第17-18页 |
| ·嗜热酶 | 第18-27页 |
| ·嗜热酶 | 第18-19页 |
| ·嗜热酶的来源 | 第19-20页 |
| ·嗜热酶的稳定性因素 | 第20-26页 |
| ·嗜热酶的种类及工业应用 | 第26-27页 |
| ·提高蛋白或酶的热稳定性方法 | 第27-34页 |
| ·蛋白质工程 | 第27-30页 |
| ·定点突变技术 | 第27-28页 |
| ·定向进化技术 | 第28-30页 |
| ·酶固定化 | 第30页 |
| ·化学修饰 | 第30-31页 |
| ·添加稳定剂 | 第31-34页 |
| 第2章 脂肪酶菌种的筛选、鉴定及酶学性质的研究 | 第34-56页 |
| ·材料 | 第34-37页 |
| ·菌种及样品 | 第34页 |
| ·试剂与药品 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第36页 |
| ·常用缓冲液 | 第36-37页 |
| ·方法与步骤 | 第37-45页 |
| ·菌种筛选 | 第37页 |
| ·脂肪酶活性的测定 | 第37-39页 |
| ·产酶条件的初步摸索 | 第39-40页 |
| ·酶的初步纯化 | 第40-41页 |
| ·酶学性质研究 | 第41-43页 |
| ·酶最适作用温度 | 第41页 |
| ·酶最适作用pH | 第41页 |
| ·酶的热稳定性 | 第41页 |
| ·酶的pH稳定性 | 第41页 |
| ·酶的底物特异性研究 | 第41-42页 |
| ·表面活性剂对酶的稳定性的影响 | 第42页 |
| ·金属离子对酶的稳定性的影响 | 第42-43页 |
| ·菌种16S rDNA鉴定 | 第43-45页 |
| ·实验结果与分析 | 第45-55页 |
| ·脂肪酶产生菌的筛选 | 第45-46页 |
| ·脂肪酶产生菌发酵条件初步摸索 | 第46-48页 |
| ·碳源对产酶的影响 | 第46页 |
| ·氮源对产酶影响 | 第46-47页 |
| ·通气量及发酵温度对产酶的影响 | 第47页 |
| ·起始pH对产酶影响 | 第47-48页 |
| ·发酵周期对产酶的影响 | 第48页 |
| ·酶的初步纯化 | 第48-49页 |
| ·酶学性质研究 | 第49-52页 |
| ·酶最适作用温度 | 第49-50页 |
| ·酶最适作用pH | 第50页 |
| ·酶的热稳定性 | 第50-51页 |
| ·酶的pH稳定性 | 第51页 |
| ·酶的底物特异性研究 | 第51页 |
| ·表面活性剂对酶稳定性的影响 | 第51-52页 |
| ·金属离子对酶稳定性的影响 | 第52页 |
| ·菌种16S rDNA鉴定 | 第52-55页 |
| ·基因组的提取 | 第52-53页 |
| ·16S rDNA的扩增、克隆与测序 | 第53-54页 |
| ·16S rDNA序列和遗传系统进化树分析 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第3章 随机突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响 | 第56-72页 |
| ·材料与方法 | 第56-57页 |
| ·菌种和载体 | 第56页 |
| ·工具酶 | 第56页 |
| ·其它试剂 | 第56页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第56-57页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第57页 |
| ·常用仪器 | 第57页 |
| ·方法与步骤 | 第57-63页 |
| ·随机突变目的基因的获得 | 第57-58页 |
| ·随机突变重组表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·重组表达载体pPIC3.5K-lip-mutants的制备 | 第59-60页 |
| ·随机突变重组体的表达 | 第60-61页 |
| ·突变体酶的鉴定 | 第61页 |
| ·突变体脂肪酶最适作用温度 | 第61-62页 |
| ·突变体脂肪酶热稳定性研究 | 第62页 |
| ·突变体脂肪酶PEL-SE1、PEL-SE2的序列测定 | 第62-63页 |
| ·实验结果与分析 | 第63-70页 |
| ·突变基因库lip-mutants的获得 | 第63-64页 |
| ·随机突变基因表达质粒库lip-mutants-pPIC3.5K的构建 | 第64-65页 |
| ·重组表达载体pPIC3.5K-lip-mutants的制备 | 第65页 |
| ·随机突变重组体的表达 | 第65页 |
| ·突变体酶的鉴定 | 第65-66页 |
| ·突变体脂肪酶最适作用温度 | 第66-67页 |
| ·突变体脂肪酶热稳定性研究 | 第67-68页 |
| ·突变脂肪酶PEL-SE1、PEL-SE2的序列测定 | 第68-70页 |
| ·小结 | 第70-72页 |
| 第4章 讨论 | 第72-76页 |
| ·脂肪酶菌种的筛选、鉴定及酶学性质的研究 | 第72-73页 |
| ·随机突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的改善 | 第73-76页 |
| 结论 | 第76-78页 |
| 附录 英文缩略词表 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 攻读学位期间承担的课研任务与主要成果 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 胡长浩·简历 | 第94-96页 |
