| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-28页 |
| ·微生物脂肪酶资源及筛选 | 第10-16页 |
| ·微生物脂肪酶资源 | 第10-13页 |
| ·有机溶剂耐受性微生物脂肪酶资源 | 第13-15页 |
| ·微生物脂肪酶的资源采集和筛选 | 第15-16页 |
| ·脂肪酶的发酵和提取 | 第16-19页 |
| ·影响脂肪酶发酵产量的因素 | 第16-17页 |
| ·发酵条件的优化策略 | 第17-18页 |
| ·脂肪酶的分离提取 | 第18-19页 |
| ·微生物脂肪酶的性质 | 第19-25页 |
| ·微生物脂肪酶的酶学性质 | 第19-20页 |
| ·微生物脂肪酶的催化特点 | 第20-22页 |
| ·微生物脂肪酶的结构特点 | 第22-25页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第25-27页 |
| ·食品工业 | 第25页 |
| ·药物开发 | 第25-26页 |
| ·洗涤剂行业 | 第26页 |
| ·生物柴油 | 第26页 |
| ·皮革加工 | 第26页 |
| ·环境治理 | 第26-27页 |
| ·造纸工业 | 第27页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第2章 脂肪酶产生菌的筛选和鉴定 | 第28-40页 |
| ·前言 | 第28页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·土样 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·溶液与试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第29-30页 |
| ·产脂肪酶菌株筛选 | 第30-31页 |
| ·样品处理 | 第30页 |
| ·油脂同化平板初筛 | 第30页 |
| ·摇瓶复筛 | 第30-31页 |
| ·菌株特性检测 | 第31页 |
| ·生长曲线测定 | 第31页 |
| ·抗生素抗性测定 | 第31页 |
| ·有机耐受能力检测 | 第31页 |
| ·形态学观察 | 第31页 |
| ·16S rDNA分子生物学鉴定 | 第31-32页 |
| ·基因组DNA提取 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增体系 | 第32页 |
| ·BLAST比对和系统进化树分析 | 第32页 |
| ·不同条件下检测脂肪酶活性 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-38页 |
| ·油脂同化平板初筛结果 | 第33页 |
| ·摇瓶复筛结果 | 第33-34页 |
| ·菌株ZYB002生长曲线 | 第34页 |
| ·菌株ZYB002抗生素抗性检测 | 第34-35页 |
| ·菌株ZYB002的有机耐受 | 第35页 |
| ·菌株ZYB002的形态学观察 | 第35页 |
| ·菌株ZYB002的分子生物学鉴定 | 第35-37页 |
| ·不同条件下检测脂肪酶活性 | 第37-38页 |
| ·不同温度下检测酶活 | 第37页 |
| ·不同温度处热处理对酶活的影响 | 第37页 |
| ·不同pH条件下检测酶活 | 第37-38页 |
| ·金属离子对脂肪酶活性的影响 | 第38页 |
| ·发酵上清液低温保存稳定性 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-40页 |
| 第3章 脂肪酶发酵优化及提取 | 第40-58页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·菌种 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·溶液与试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第41页 |
| ·蛋白酶活力测定 | 第41页 |
| ·蛋白含量测定 | 第41页 |
| ·发酵 | 第41-42页 |
| ·硫酸按沉淀 | 第42页 |
| ·双水相萃取 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-55页 |
| ·最适碳源的选择 | 第42-43页 |
| ·最适氮源的选择 | 第43页 |
| ·最适诱导剂的选择 | 第43-44页 |
| ·发酵周期的确定 | 第44页 |
| ·Plackett-Burrman设计筛选影响产酶主要因素 | 第44-46页 |
| ·最陡爬坡实验确定主要因素水平中心点 | 第46-47页 |
| ·响应面实验设计确定主要因素的最优水平 | 第47-50页 |
| ·培养温度对发酵的影响 | 第50-51页 |
| ·溶解氧对发酵的影响 | 第51-52页 |
| ·不同表面活性剂对脂肪酶活性的影响 | 第52页 |
| ·脂肪酶活性与相关指标的变化 | 第52-54页 |
| ·脂肪酶活性与发酵液pH的变化 | 第52-53页 |
| ·脂肪酶活性与菌浓的变化 | 第53页 |
| ·脂肪酶活性与蛋白酶活性的变化 | 第53-54页 |
| ·脂肪酶提取方法的比较 | 第54-55页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第54页 |
| ·双水相萃取 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-58页 |
| 第4章 脂肪酶基因克隆及生物信息学分析 | 第58-76页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·菌种及质粒 | 第58页 |
| ·酶及相关试剂 | 第58页 |
| ·仪器 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·ZYB002脂肪酶基因克隆 | 第59页 |
| ·目的基因的获得 | 第59页 |
| ·TA克隆 | 第59页 |
| ·SDS碱裂解法抽提质粒 | 第59页 |
| ·生物信息学分析 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-73页 |
| ·目的基因的获得 | 第60-61页 |
| ·TA克隆 | 第61-62页 |
| ·ZYB002脂肪酶基因的生物信息学分析 | 第62-68页 |
| ·脂肪酶基因的BLAST同源性分析 | 第62页 |
| ·Lip蛋白的氨基酸序列预测 | 第62页 |
| ·Lip蛋白的同源性分析及序列比对 | 第62-64页 |
| ·Lip蛋白信号肽分析 | 第64-65页 |
| ·Lip蛋白二级结构预测 | 第65页 |
| ·Lip蛋白的结构域和motif预测 | 第65页 |
| ·Lip蛋白的理化性质预测 | 第65-66页 |
| ·Lip蛋白的三级结构预测及评估 | 第66-68页 |
| ·ZYB002脂肪酶伴侣蛋白基因的生物信息学分析 | 第68-73页 |
| ·脂肪酶伴侣蛋白基因的BLAST同源性分析 | 第68页 |
| ·Lif蛋白的氨基酸序列预测 | 第68页 |
| ·Lif蛋白的同源性分析及序列比对 | 第68-70页 |
| ·Lif蛋白疏水性分析和跨膜区预测 | 第70-71页 |
| ·Lif蛋白二级结构预测 | 第71页 |
| ·Lif蛋白结构域预测 | 第71-72页 |
| ·Lif蛋白三级结构预测及评估 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人简历 | 第85页 |