| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 国内外研究现状 | 第15-18页 |
| 1.2 研究的目的和意义 | 第18页 |
| 1.3 研究内容与技术路线 | 第18-20页 |
| 1.3.1 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.3.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 1.4 研究目标 | 第20-21页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp4与猪肺泡巨噬细胞相互作用蛋白的筛选与鉴定 | 第21-36页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.2.2 方法 | 第25-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-34页 |
| 2.3.1 诱饵蛋白表达、自激活和毒性检测 | 第31-32页 |
| 2.3.2 猪肺泡巨噬细胞cDNA文库的筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.3 候选蛋白Cyto.c1酵母重组质粒的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.4 PRRSV Nsp4蛋白与Cyto.c1蛋白在酵母细胞中相互作用的验证 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 2.5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp4与细胞色素c1相互作用的生物学功能分析 | 第36-56页 |
| 3.1 前言 | 第36-37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-43页 |
| 3.2.1 材料 | 第37-39页 |
| 3.2.2 方法 | 第39-43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-54页 |
| 3.3.1 Nsp4和Cyto.c1表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.3.2 Nsp4和Cyto.c1点突变表达载体的构建 | 第44页 |
| 3.3.3 表达Nsp4慢病毒的拯救 | 第44页 |
| 3.3.4 表达Nsp4慢病毒转导MARC-145细胞鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.5 免疫共沉淀技术验证Nsp4蛋白和Cyto.c1蛋白的相互作用 | 第45页 |
| 3.3.6 激光共聚焦检测Nsp4和Cyto.c1在细胞中的共定位 | 第45-47页 |
| 3.3.7 PRRSV感染和PRRSV Nsp4诱导MARC-145细胞凋亡 | 第47-48页 |
| 3.3.8 MARC-145细胞中干扰内源性Cyto.c1的表达 | 第48-49页 |
| 3.3.9 干扰内源性Cyto.c1的表达可以抑制PRRSV感染和PRRSV Nsp4诱导MARC-145细胞凋亡 | 第49-51页 |
| 3.3.10 PRRSV感染后Cyto.c1发生剪切 | 第51页 |
| 3.3.11 PRRSV Nsp4而非Nsp2剪切Cyto.c1 | 第51-52页 |
| 3.3.12 Cyto.c1的剪切依赖于Nsp4 3CLSP催化活性且呈剂量依赖性 | 第52-53页 |
| 3.3.13 Nsp4于E230-G231剪切Cyto.c1 | 第53-54页 |
| 3.3.14 干扰内源性Cyto.c1的表达对PRRSV在MARC-145细胞中的复制无影响 | 第54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp4与细胞色素c1相互作用功能域的分析 | 第56-69页 |
| 4.1 前言 | 第56-57页 |
| 4.2 材料与方法 | 第57-60页 |
| 4.2.1 材料 | 第57-58页 |
| 4.2.2 方法 | 第58-60页 |
| 4.3 结果与分析 | 第60-67页 |
| 4.3.1 Nsp4和Cyto.c1截短表达载体的构建及表达鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3.2 免疫共沉淀技术验证Nsp4蛋白和Cyto.c1蛋白的相互作用结构域 | 第61页 |
| 4.3.3 激光共聚焦检测Nsp4不同截短体和Cyto.c1不同截短体在细胞中的共定位 | 第61-63页 |
| 4.3.4 Cyto.c1及其截短体对细胞凋亡的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.5 Cyto.c1(1～230)引起细胞线粒体片段化 | 第64-65页 |
| 4.3.6 表达Nsp4、Nsp4 (H39A)、Nsp4 (D64A)和Nsp4 (S118A)慢病毒的拯救 | 第65-66页 |
| 4.3.7 表达Nsp4、Nsp4(H39A)、Nsp4(D64A)和Nsp4(S118A)慢病毒转导MARC-145细胞鉴定 | 第66-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-68页 |
| 4.5 小结 | 第68-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| 第六章 创新点 | 第70-71页 |
| 第七章 文献综述 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染与细胞凋亡 | 第71-81页 |
| 7.1 细胞凋亡信号通路 | 第71-75页 |
| 7.1.1 细胞凋亡 | 第71-72页 |
| 7.1.2 细胞凋亡过程中的形态学和分子变化 | 第72页 |
| 7.1.3 凋亡过程中的主要参与者 | 第72-73页 |
| 7.1.4 细胞凋亡的机制 | 第73-75页 |
| 7.2 PRRSV感染与细胞凋亡 | 第75-80页 |
| 7.2.1 PRRSV体内感染与细胞凋亡 | 第76-78页 |
| 7.2.2 PRRSV体外感染与细胞凋亡 | 第78-79页 |
| 7.2.3 PRRSV编码蛋白与细胞凋亡 | 第79-80页 |
| 7.3 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 作者简介 | 第93页 |
