| 摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| ·研究的目的及意义 | 第12-13页 |
| ·文献综述 | 第13-22页 |
| ·木聚糖的应用及研究进展 | 第13-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第18-22页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-30页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌株及质粒 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·载体构建 | 第25-26页 |
| ·木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第26-27页 |
| ·重组木聚糖酶酶学性质的研究 | 第27-28页 |
| ·毕赤酵母重组菌摇瓶发酵条件的研究 | 第28-29页 |
| ·木聚糖酶酶解产物分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-53页 |
| ·载体构建 | 第30-41页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pGAPHα-xyn2 的构建 | 第30-31页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pGAPRHα-xyn2 的构建 | 第31-34页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pGAPHINU-xyn2 的构建 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pGAPHαM-xyn2 的构建 | 第35-37页 |
| ·毕赤酵母表达载体 pGAPHαE-xyn2 的构建 | 第37-41页 |
| ·木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第41-44页 |
| ·毕赤酵母表达载体的性线化 | 第41页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第41-42页 |
| ·木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第42-43页 |
| ·木聚糖酶的蛋白分析 | 第43-44页 |
| ·木聚糖酶性质的研究 | 第44-48页 |
| ·最适温度的测定 | 第44页 |
| ·最适pH 的测定 | 第44-45页 |
| ·热稳定性的测定 | 第45-46页 |
| ·酸碱稳定性的测定 | 第46-47页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第47-48页 |
| ·毕赤酵母重组菌摇瓶发酵条件的摸索 | 第48-52页 |
| ·初始pH 对产酶的影响 | 第48页 |
| ·培养温度对产酶的影响 | 第48-49页 |
| ·培养时间对产酶的影响 | 第49-50页 |
| ·装液量对产酶的影响 | 第50-51页 |
| ·Triton 添加量对产酶的影响 | 第51页 |
| ·EDTA 添加量对产酶的影响 | 第51-52页 |
| ·木聚糖酶酶解产物分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·启动子的选择 | 第53页 |
| ·信号肽的选择 | 第53-54页 |
| ·菊粉酶信号肽的选择 | 第53页 |
| ·α-Factor 信号肽的改选 | 第53-54页 |
| ·毕赤酵母的转化方式 | 第54页 |
| ·毕赤酵母转化子的鉴定 | 第54页 |
| ·发酵条件对产酶的影响 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-57页 |
| ·表达载体的构建 | 第55页 |
| ·木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第55页 |
| ·重组木聚糖酶的酶学性质 | 第55页 |
| ·摇瓶发酵条件的摸索 | 第55-56页 |
| ·木聚糖酶酶解产物分析 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
