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双价Bt抗虫水稻的培育和转基因水稻回交效应分析

摘要第1-10页
Abstract第10-13页
缩略词表第13-14页
1 前言第14-38页
   ·苏云金芽胞杆菌及其杀虫晶体蛋白第14-18页
     ·苏云金芽胞杆菌简介第14页
     ·Bt杀虫品体蛋白及其分类第14-15页
     ·Bt杀虫品体蛋白的结构和杀虫机理第15-16页
     ·Bt杀虫晶体蛋白在农业害虫防治中的应用第16-18页
   ·昆虫对Bt蛋白的抗性第18-27页
     ·昆虫对Bt作物产生抗性的风险第18-21页
     ·昆虫的Bt蛋白抗性机制和遗传特性第21-26页
       ·蛋白酶介导的昆虫Bt抗性第21-22页
       ·昆虫的Bt蛋白受体第22页
       ·Bt毒蛋白与中肠受体结合的改变第22-24页
       ·Model型抗性第24-25页
       ·新的抗性类型第25-26页
     ·抗性基因的鉴定和检测第26-27页
   ·昆虫抗性治理的策略第27-32页
     ·中等剂量第27页
     ·高等剂量第27-28页
     ·Bt毒素时空特异性表达第28页
     ·庇护所第28页
     ·高剂量/庇护所第28-29页
     ·基因聚合第29-31页
     ·害虫综合治理第31-32页
   ·水稻的转基因抗虫育种和回交育种第32-35页
     ·水稻的害虫治理第32-33页
     ·农杆菌介导的转化及表型变异第33-34页
     ·转基因水稻中的体细胞变异第34-35页
     ·回交育种第35页
   ·侧翼序列的分离方法第35-36页
   ·本研究的目的和意义第36-38页
2 材料与方法第38-50页
   ·实验材料第38页
     ·水稻材料第38页
     ·供试昆虫第38页
   ·实验方法第38-50页
     ·Bt基因的杂交聚合第38-39页
     ·聚合后代的PCR检测和双价Bt纯合株系的筛选第39-41页
     ·双价纯合株系中Bt蛋白含量的测定第41-43页
       ·Bt蛋白含量测定试剂盒和水稻样品第41页
       ·蛋白含量测定溶液和样品的制备第41页
       ·ELISA反应和蛋白含量计算第41-43页
     ·双价纯合株系的室内抗虫性评价第43页
     ·双价纯合株系及其杂交种的田间抗虫性评价第43-44页
     ·双价纯合株系及其杂交种的农艺性状考察第44页
     ·单价株系1Ac、1C和2A的连续回交和BC_nF_3纯合株系的筛选第44-45页
     ·BC_nF_3纯合株系的室内抗虫性评价第45-46页
     ·BC_nF_3纯合株系的农艺性状考察第46页
     ·单价亲本株系1C和2A的Southern杂交检测第46-48页
       ·水稻叶片总DNA的抽提第46-47页
       ·Southern印迹转移第47-48页
       ·分子杂交第48页
     ·单价亲本株系1C和2A侧翼序列的反向PCR分离第48-50页
3 结果与分析第50-68页
   ·双价Bt纯合株系的筛选第50页
   ·双价纯合株系中的Bt蛋白浓度第50-54页
     ·双价纯合株系中的Cry1Ab蛋白浓度第50-51页
     ·双价纯合株系中的Cry1Ac蛋白浓度第51-52页
     ·双价纯合株系中的Cry1C蛋白浓度第52-54页
     ·双价纯合株系中的Cry2A蛋白浓度第54页
   ·转基因纯合株系在室内的抗虫性第54-56页
     ·转基因纯合株系对三化螟的抗性第54页
     ·转基因纯合株系对二化螟的抗性第54-56页
   ·转基因纯合株系及其杂交种在田间的抗虫性第56-58页
     ·转基因纯合株系在田间的抗虫性第56-58页
     ·转基因杂交种在田间的抗虫性第58页
   ·转基因纯合株系及其杂交种在田间的农艺性状第58-62页
     ·转基因纯合株系在田间的农艺性状第58页
     ·转基因杂交种在田间的农艺性状第58-62页
   ·BC_nF_3纯合株系的筛选第62页
   ·回交后代在田间和室内的抗虫性第62-64页
   ·BC_nF_3纯合株系在田间的农艺性状第64页
   ·株系1C和2A单个插入位点上外源基因的拷贝数第64页
   ·株系1C和2A的T-DNA侧翼序列第64-68页
4 讨论第68-78页
   ·有性杂交中的基因组合第68页
   ·Bt基因在聚合后代中的遗传方式和稳定性第68-69页
   ·Ubiquitin启动子控制的基因表达第69-70页
   ·室内抗虫性试验的指导意义第70-71页
   ·田间抗虫性试验的指导意义第71-72页
   ·基因聚合对水稻农艺性状的影响第72-73页
   ·双价Bt水稻的应用前景第73页
   ·室内和田间试验中的问题及改进方法第73-75页
     ·水稻中的Bt蛋白含量测定第73-74页
     ·转基因水稻株系的室内抗虫性第74页
     ·田间的随机区组试验第74-75页
   ·体细胞变异与水稻的转基因育种第75-76页
   ·回交后代的应用前景第76页
   ·株系1Ac、1C、2A和MH63两次产量考察结果的比较第76页
   ·反向PCR在T-DNA侧翼序列分离中的优缺点第76-78页
参考文献第78-94页
附录Ⅰ 培育基和试剂配方第94-96页
附录Ⅱ 个人简历第96-97页
致谢第97页

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