| 摘要 | 第11-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| 第一节 实时荧光PCR技术 | 第14-17页 |
| 1.1 实时荧光PCR简介 | 第14页 |
| 1.2 实时荧光PCR的化学基础 | 第14-15页 |
| 1.3 实时荧光PCR的定性分析 | 第15-17页 |
| 第二节 PCR反应中的非特异扩增 | 第17-19页 |
| 2.1 引物和引物间的非特异扩增 | 第17-18页 |
| 2.2 引物和模板间的非特异扩增 | 第18-19页 |
| 第三节 本论文的研究目的和研究内容 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-27页 |
| 第二章 抑制引物二聚体的引物设计策略研究 | 第27-66页 |
| 第一节 前言 | 第27-30页 |
| 1.1 DPO技术抑制引物二聚体的基本原理 | 第27-28页 |
| 1.2 HAND系统抑制引物二聚体的基本原理 | 第28-29页 |
| 1.3 本节的研究内容 | 第29-30页 |
| 第二节 材料与方法 | 第30-45页 |
| 2.1 DPO技术与HAND系统在单重扩增中抑制引物二聚体的效果 | 第30-33页 |
| 2.1.1 质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.1.2 引物的设计 | 第31-32页 |
| 2.1.3 PCR反应条件 | 第32-33页 |
| 2.2 DPO技术与HAND系统在多重扩增中抑制引物二聚体的效果 | 第33-38页 |
| 2.2.1 短片段多重扩增 | 第33-35页 |
| 2.2.2 长片段多重扩增 | 第35-38页 |
| 2.3 HAND系统对不同长度扩增片段的影响 | 第38-41页 |
| 2.3.1 由加尾引物扩增的产物的制备 | 第38-40页 |
| 2.3.2 PCR反应条件 | 第40-41页 |
| 2.3.3 扩增效率与线性关系 | 第41页 |
| 2.4 不同Tag的考察 | 第41-43页 |
| 2.4.1 Tag的设计 | 第41-42页 |
| 2.4.2 引物二聚体的模拟 | 第42-43页 |
| 2.4.3 PCR反应条件 | 第43页 |
| 2.4.4 扩增效率与线性关系 | 第43页 |
| 2.5 不同退火温度的考察 | 第43-44页 |
| 2.5.1 Tag的选择 | 第43页 |
| 2.5.2 模板DNA | 第43-44页 |
| 2.5.3 PCR反应条件 | 第44页 |
| 2.6 Tag自身考察 | 第44-45页 |
| 2.6.1 Tag的设计 | 第44页 |
| 2.6.2 反应条件 | 第44-45页 |
| 2.6.3 测序分析 | 第45页 |
| 第三节 结果与分析 | 第45-61页 |
| 3.1 DPO技术与HAND系统在单重扩增中抑制引物二聚体的效果 | 第45-46页 |
| 3.2 DPO技术与HAND系统在多重扩增中抑制引物二聚体的效果 | 第46-51页 |
| 3.2.1 短片段多重扩增 | 第46-48页 |
| 3.2.2 长片段多重扩增 | 第48-51页 |
| 3.3 HAND系统对不同长度扩增片段的影响 | 第51-53页 |
| 3.4 不同Tag的考察 | 第53-55页 |
| 3.5 不同退火温度的考察 | 第55-57页 |
| 3.6 Tag自身考察 | 第57-61页 |
| 第四节 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 第三章 提高引物3'端特异性的引物设计策略研究 | 第66-92页 |
| 第一节 五种引物设计策略的比较 | 第66-79页 |
| 1.1 引言 | 第66-70页 |
| 1.1.1 SuperSelective引物的基本原理 | 第66-67页 |
| 1.1.2 Looping out引物的提出 | 第67-68页 |
| 1.1.3 DPO引物的基本原理 | 第68-69页 |
| 1.1.4 DPO-A引物的提出 | 第69页 |
| 1.1.5 ARMS引物的基本原理 | 第69-70页 |
| 1.1.6 本节研究内容 | 第70页 |
| 1.2 材料与方法 | 第70-74页 |
| 1.2.1 细胞系DNA | 第70页 |
| 1.2.2 阳性质粒的构建 | 第70-71页 |
| 1.2.3 特异性考察 | 第71-73页 |
| 1.2.4 最低检测限考察 | 第73页 |
| 1.2.5 选择性考察 | 第73-74页 |
| 1.3 结果与分析 | 第74-77页 |
| 1.3.1 特异性考察 | 第74-75页 |
| 1.3.2 最低检测限考察 | 第75-76页 |
| 1.3.3 选择性考察 | 第76-77页 |
| 1.4 讨论 | 第77-79页 |
| 第二节 二维标签结合SuperSelective引物的研究 | 第79-90页 |
| 2.1 引言 | 第79-80页 |
| 2.2 材料与方法 | 第80-84页 |
| 2.2.1 位置相近的检测点考察 | 第80-83页 |
| 2.2.2 相隔较远的检测点考察 | 第83-84页 |
| 2.3 结果与分析 | 第84-88页 |
| 2.3.1 位置相近的检测点考察 | 第84-86页 |
| 2.3.2 相隔较远的检测点考察 | 第86-88页 |
| 2.4 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-92页 |
| 英文缩写索引 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
