| 缩写词表 | 第10-12页 |
| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-22页 |
| 1. 少突胶质细胞(Oligodendrocyte) | 第15-17页 |
| 1.1 突胶质细胞的发育过程 | 第15页 |
| 1.2 少突胶质细胞的功能 | 第15-16页 |
| 1.3 少突胶质细胞的分化调控机制 | 第16-17页 |
| 2. RNF2相关介绍 | 第17-21页 |
| 2.1 Polycomb group (PcG) proteins家族简介及早期研究 | 第17页 |
| 2.2 Polycomb repressive complexes 1(PRC1)简介及功能介绍 | 第17-19页 |
| 2.3 Polycomb repressive complexes 2(PRC2)简介及功能介绍 | 第19页 |
| 2.4 PRC1对神经干细胞的影响 | 第19-20页 |
| 2.5 PRC1对肿瘤细胞的影响 | 第20-21页 |
| 2.6 PRC1影响X染色体失活 | 第21页 |
| 3. 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料和方法 | 第22-60页 |
| 1. 材料 | 第22-33页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第22-24页 |
| 1.2 免疫荧光染色所用抗体 | 第24-25页 |
| 1.3 Western bloting所用抗体 | 第25页 |
| 1.4 细胞培养基Medium | 第25-27页 |
| 1.5 细胞培养Buffer | 第27-28页 |
| 1.6 免疫荧光染色buffer | 第28-29页 |
| 1.7 实验所用部分试剂配方 | 第29-33页 |
| 2. 主要仪器及设备 | 第33-34页 |
| 3. 实验方法 | 第34-60页 |
| 3.1 子克隆 | 第34-42页 |
| 3.1.1 质粒的设计及shRNA的构建 | 第34-35页 |
| 3.1.2 PCR反应 | 第35-36页 |
| 3.1.3 shRNA质粒构建 | 第36-37页 |
| 3.1.4 酶切片段和载体 | 第37页 |
| 3.1.5 回收及纯化 | 第37-38页 |
| 3.1.6 片段和载体连接 | 第38页 |
| 3.1.7 连接产物转化 | 第38-39页 |
| 3.1.8 LIC法 | 第39-40页 |
| 3.1.9 小量抽提质粒DNA | 第40-41页 |
| 3.1.10 中量抽提质粒DNA | 第41-42页 |
| 3.2 细胞培养方法 | 第42-48页 |
| 3.2.1 HEK293T细胞培养 | 第42-44页 |
| 3.2.2 B104细胞培养 | 第44页 |
| 3.2.3 OLN93细胞培养 | 第44-45页 |
| 3.2.4 大鼠少突胶质细胞原代培养 | 第45-48页 |
| 3.3 慢病毒感染细胞 | 第48-50页 |
| 3.3.1 病毒包装 | 第48页 |
| 3.3.2 慢病毒收集和浓缩 | 第48-49页 |
| 3.3.3 慢病毒感染细胞 | 第49-50页 |
| 3.4 OLN93稳定表达细胞系的构建 | 第50-51页 |
| 3.4.1 确定药物浓度 | 第50页 |
| 3.4.2 稳定细胞系药物筛选及单克隆细胞系的获得 | 第50-51页 |
| 3.5 生化分子检测实验 | 第51-59页 |
| 3.5.1 Tripure法提取样品RNA | 第51-52页 |
| 3.5.2 逆转录RNA | 第52-53页 |
| 3.5.3 实时荧光定量PCR | 第53-55页 |
| 3.5.6 细胞蛋白提取及制样 | 第55-56页 |
| 3.5.8 蛋白质免疫印迹法(western blot) | 第56-57页 |
| 3.5.9 细胞免疫荧光染色 | 第57-58页 |
| 3.5.10 BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)染色 | 第58-59页 |
| 3.6 RNA-seq检测相关 | 第59-60页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第60-76页 |
| 1. RNF2基因在神经胶质细胞中的表达 | 第60-61页 |
| 2. RNF2基因在少突胶质细胞中的表达状况 | 第61-63页 |
| 2.1 RNF2存在于少突胶质细胞中 | 第61页 |
| 2.2 RNF2在少突胶质细胞中表达情况 | 第61-63页 |
| 3. RNF2对少突胶质细胞发育的影响 | 第63-70页 |
| 3.1 少突胶质细胞中过表和敲低RNF2 | 第63-64页 |
| 3.2 构建稳定过表达和持续敲低RNF2的OLN93细胞系 | 第64-65页 |
| 3.3 RNF2影响少突胶质细胞的增殖 | 第65-67页 |
| 3.4 RNF2对细胞周期蛋白及相关蛋白的影响 | 第67-68页 |
| 3.5 过表和敲低RNF2对少突胶质细胞的分化的影响 | 第68-69页 |
| 3.6 RNF2对少突胶质细胞凋亡的影响 | 第69-70页 |
| 4. RNA-seq结果展示及分析 | 第70-73页 |
| 5. RNF2对NF-kB家族蛋白的影响 | 第73-74页 |
| 6. RNF2引起少突胶质细胞H2AUi修饰改变 | 第74-76页 |
| 第四章 讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
