| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-31页 |
| 第一章 兔巴氏杆菌病的研究现状 | 第12-20页 |
| 1 兔巴氏杆菌病的流行病学研究 | 第12-13页 |
| ·临诊症状 | 第12-13页 |
| ·病理剖检变化 | 第13页 |
| 2 多杀性巴氏杆菌生物学特性 | 第13-16页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的分类地位 | 第13-14页 |
| ·培养及生化特性 | 第14-15页 |
| ·菌落型 | 第15页 |
| ·血清型 | 第15-16页 |
| 3 兔多杀性巴氏杆菌病的防制 | 第16-20页 |
| ·多杀性巴氏杆菌病疫苗的发展 | 第16-18页 |
| ·交叉保护因子 | 第18-20页 |
| 第二章 巴氏杆菌病诊断方法的研究进展 | 第20-26页 |
| 1 多杀性巴氏杆菌病传统诊断方法 | 第20页 |
| 2 分子生物学诊断的方法 | 第20-24页 |
| ·16S rRNA基因测序法 | 第21-22页 |
| ·常规PCR诊断技术 | 第22-24页 |
| 3 血清学诊断方法 | 第24-26页 |
| ·琼脂免疫扩散试验 | 第24-25页 |
| ·ELISA检测方法 | 第25-26页 |
| 第三章 多杀性巴氏杆菌主要外膜蛋白 | 第26-31页 |
| 1 外膜蛋白概述 | 第26页 |
| 2 OMPs的免疫保护作用 | 第26-27页 |
| 3 外膜蛋白的应用前景 | 第27页 |
| 4 多杀性巴氏杆菌主要外膜蛋白 | 第27-31页 |
| ·结构蛋白 | 第27-28页 |
| ·转运蛋白 | 第28-30页 |
| ·结合蛋白 | 第30页 |
| ·其它微量蛋白 | 第30-31页 |
| 实验研究 | 第31-71页 |
| 第四章 基于兔多杀性巴氏杆菌16S rRNA PCR检测方法的建立和应用 | 第31-41页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-36页 |
| ·PCR引物设计 | 第31-32页 |
| ·模板DNA的制备 | 第32页 |
| ·PCR反应体系 | 第32-33页 |
| ·PCR反应扩增参数的优化 | 第33-34页 |
| ·特异性试验 | 第34页 |
| ·敏感性试验 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增产物酶切鉴定 | 第35页 |
| ·PCR检测方法的检验 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-38页 |
| ·PCR扩增 | 第36页 |
| ·PCR扩增参数的确定 | 第36-37页 |
| ·特异性试验 | 第37-38页 |
| ·敏感性试验 | 第38页 |
| ·PCR产物酶切鉴定 | 第38页 |
| ·PCR检测方法的检验 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 第五章 兔多杀性巴氏杆菌OmpA基因原核表达载体的构建和表达 | 第41-58页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| ·菌种与质粒 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-50页 |
| ·OmpA的扩增与纯化回收 | 第42-44页 |
| ·目的基因的克隆 | 第44-46页 |
| ·OmpA的原核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·原核表达、鉴定及表达条件优化 | 第48-49页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第49页 |
| ·重组表达蛋白的免疫原性分析 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-55页 |
| ·OmpA基因片段的扩增 | 第50-51页 |
| ·OmpA的克隆及鉴定 | 第51-52页 |
| ·OmpA的原核表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·基因工程菌的表达及表达条件的优化 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·重组表达蛋白的免疫原性分析 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 第六章 兔多杀性巴氏杆菌间接ELISA检测方法的初步建立 | 第58-71页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| ·菌株 | 第58页 |
| ·兔多杀性巴氏杆菌阳性、阴性血清的制备 | 第58-59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-63页 |
| ·抗原包被最佳浓度的确定和阳性血清最适浓度的选择 | 第59-60页 |
| ·抗原包被条件的选择 | 第60页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第60页 |
| ·封闭时间的选择 | 第60-61页 |
| ·阴阳性血清最佳反应时间的选择 | 第61页 |
| ·酶标抗体工作时间的选择 | 第61页 |
| ·阴性血清临界值的选择 | 第61页 |
| ·敏感性试验 | 第61-62页 |
| ·交叉反应试验 | 第62页 |
| ·阻断试验 | 第62页 |
| ·重复性试验 | 第62页 |
| ·ELISA方法的应用 | 第62-63页 |
| 3 结果 | 第63-69页 |
| ·外膜抗原和阳性血清最适浓度的选择试验结果 | 第63页 |
| ·OmpA蛋白抗原包被条件的确定 | 第63-64页 |
| ·封闭液的确定 | 第64页 |
| ·封闭时间的确定 | 第64-65页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第65页 |
| ·酶标抗体工作时间的确定 | 第65页 |
| ·阴性血清临界值的确定 | 第65-66页 |
| ·敏感性试验 | 第66页 |
| ·交叉性试验 | 第66-67页 |
| ·阻断试验 | 第67页 |
| ·重复性试验 | 第67-69页 |
| ·ELISA方法的应用结果 | 第69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 常用缓冲液及溶液配制 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第86-87页 |
